课题3 血红蛋白的提取和分离
一、课题目标
1.知识目标
a.说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法。

b.说明凝胶色谱法的原理和方法。

c.说出电泳的基本原理和方法。

2.能力目标
运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。

3.情感目标
通过运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。

二、课题重点
凝胶色谱法的原理和方法。

三、课题难点
样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。

一、基础知识
（一）蛋白质提取与分离的依据
引导学生回忆蛋白质的物理化学性质，指出其是蛋白质提取与分离的依据。

1.分子的形状、大小
2.电荷性质和多少
3.溶解度
4.吸附性质
5.对其他分子亲和力
（二）方法及原理
概述蛋白质分离的两种常用方法和原理，再分别详细讲解。

凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质
电泳法：根据分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同分离蛋白质
1.凝胶色谱法
（1）材料：凝胶
展示图解，讲解种类和特点。

多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。

（2）原理：指导学生观察教材图5-13凝胶色谱法分离蛋白质的原理，讲解分离过程。

步骤：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子
原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；
1.红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。

2.色谱柱的装填：装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。

3.凝胶的预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡。

4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。

四、结果分析与评价
讲解几个方面的结果分析与评价。

1.血液样品的处理：分层明显→样品处理完成
2.凝胶色谱柱的装填：放一支与凝胶柱垂直的日光灯直接检查加入大分子有色物质如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、平整→装填成功。

3.血红蛋白的分离
血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出，分离成功。

共同回顾本节要点：。