胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒
产品编号产品名称包装
SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×
产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。

本试剂盒主要原理是在低渗透压条
件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉
淀。

最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒是本公司
非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部
分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白
浓度约为 2.5ug/ul或更高。

抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，
footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

本试剂盒可足够您进行
50次抽提操作！
包装清单：
试剂包装总量
5X Buffer A 1瓶35ml/瓶
2X Buffer B1支 1.5ml/支
Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支
Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支
Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支
PMSF Solution 1支0.85ml/支
User Manual (说明书)
1份1份/Kit
保存温度： 4℃保存。

Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：
1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：
试剂体积
5X Buffer A0.6ml
Solution I（溶液I）30ul
Solution II（溶液II）30ul
PMSF Solution 15ul
dd-H2O 2.325ml
总体积 3.0ml
注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。

2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：
试剂体积
Solution III（溶液III）20ul
胞浆蛋白裂解液I 1.0ml
总体积 1.02ml
3.制备1ml核裂解液：
试剂体积
2X Buffer B25ul
Solution I（溶液I）0.5ul
Solution II（溶液II）0.5ul
PMSF Solution0.25ul
dd-H2O23.75ul
总体积 50ul
注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。

Ⅱ. 细胞核蛋白抽提步骤：
贴壁细胞胞浆蛋白—核蛋白制备：
1.将50ml规格的细胞培养物（细胞生长面积约24cm2）置于冰盒上低温操作。

2.弃培养瓶中上清培养液，加3ml 冷1X PBS于细胞培养瓶中漂洗细胞两次。

3.取1.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗细胞一次，弃漂洗后的缓冲液。

4.取1.0ml胞浆蛋白裂解液II于培养瓶中溶解细胞，可用1.0ml移液枪贴壁吹打细胞多次,可
以在显微镜下观察细胞的裂解情况。

5.尽量吸干净培养瓶中的裂解液，转入1.5ml离心管中，4℃，14000 rpm 离心2min.
6.用移液器分开上清和沉淀，上清液即为胞浆蛋白液，请于－80℃保存。

7.取0.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗沉淀一次，4℃，14000 rpm 离心2min，弃上清。

8.取50ul 核裂解液重悬沉淀，4℃，静置离心管30min,并不是剧烈震动重悬沉淀。

同时调离
心机冷却至4℃。

9.4℃，14000rpm 离心 20min.
10.取上清液（即核抽提物）与－80℃保存。

悬浮细胞胞浆—核蛋白制备：
1. 将细胞培养物置于冰盒上低温操作，将离心机。

2. 将约8ml细胞培养物（50ml规格培养平培养）转入离心管中，3000rpm离心3min，弃上清，
获得细胞。

3. 再用1.5ml 1X PBS漂洗细胞两次, 3000rpm离心，弃漂洗后的1X PBS，同时将离心机冷却
至4℃。

4. 加1.5ml胞浆蛋白裂解液I于离心管中，漂洗细胞一次，3000rpm离心2min，弃上清。

5. 加1.0ml胞浆蛋白裂解液II于离心管中，混悬沉淀，低温下振荡约5-10min溶解细胞。

6. 4℃，14000 rpm 离心2min。

7. 用移液器分开上清和沉淀，上清液即为胞浆蛋白液，请于－80℃保存。

8.取0.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗沉淀一次，4℃，14000 rpm 离心2min，弃上清。

9. 用50ul 核裂解液重悬沉淀，4℃，静置离心管30min。

10.4℃，14000rpm 离心 20min.
11. 取上清液（即核抽提物）与－80℃保存。

Ⅲ. 注意事项：
1.收到本试剂盒后，请立即检查试剂瓶的包装与密封是否完好。

若有破损请在接货后24
小时内与本公司联系。

2.本试剂盒有效期为12个月，请严格按照试剂瓶上的说明保存所有试剂。

3.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4.本操作步骤及试剂用量是以24cm2贴壁细胞(或1瓶50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)为例
进行操作获得50ul核蛋白和1.0ml胞浆蛋白。

如果您每次抽提的量增加，您可以按比例
配制抽提试剂，如：抽提48cm2贴壁细胞(或2瓶50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)您可以
制备6ml胞浆蛋白裂解液I，2.0ml胞浆蛋白裂解液II和100ul核裂解液.
5.获得的核蛋白浓度的大小和您抽提健康细胞密度有关。

6.PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很
快失效。

7.使用本试剂盒抽提得到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白都可以直接用BCA法测定蛋白浓度。

8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。