牛羊布氏杆菌病血清学诊断
【目的要求】
通过布氏杆菌病血清学试管凝集反应和玻板凝集反应及变态反应的操作，掌握牛羊布氏杆菌病的检疫方法。

【设备与材料】
器材恒温箱、灭菌试管、采血用注射器及针头、皮内注射器及针头、小试管及试管架、各种刻度吸管、平板凝集试验箱、酒精灯、火柴、玻璃板、蜡笔、牙签、洗耳球、工作衣帽、废弃缸。

药品来苏儿或新洁尔灭、0.5％石炭酸生理盐水或5%～10%盐水、生理盐水、布氏杆菌试管凝集抗原和玻板凝集抗原、布氏杆菌水解素、布病阳性和阴性血清、70%酒精棉球、5%碘酊棉球等。

【方法步骤】
一．血清凝集反应试验
采血及血清的分离：被检牛、羊颈静脉无菌操作采血10～15mL，于灭菌试管中，倾斜放置10～12h,待血清析出后,用毛细吸管吸取血清于标有畜号的灭菌试管内，封存被检。

1．试管凝集反应
（1）操作方法：
①取洁净小试管7支编号后于试管架上，分别按表1-1，加入0.5%石炭酸生理盐水（第1管加1.15 mL，第2～5管加入0. 5 mL,第6、7管不加）。

②吸取被检血清0.1mL加入第1管中,混匀后吸出0.25mL弃入废弃缸内,再吸入
0.5mL加入第2管中,混匀,吸取0.5mL加入第3管,以此类推至第4管中,混匀后吸出0.5mL弃入废弃缸内,使1～4管均为0.5 mL,而被检血清递减稀释到1:200倍。

对照组第5管中不加血清,第6管中加入1:25稀释的布氏杆菌标准阳性血清
0.5mL,第7管中加入1:25稀释的布氏杆菌标准阴性血清0.5mL。

③每管加入0.5mL1：20稀释抗原（用0.5%石炭酸生理盐水将布氏杆菌试管凝集抗原进行1：20的稀释）。

④加样完毕，振荡使被检血清和抗原充分混合后，置于37℃恒温箱中12～18h,取出后在室温中静置2～4h。

观察并判定结果。

（2）结果判定
＋＋＋＋:细菌100%凝集，呈伞状沉淀于管底，上层液清亮透明。

＋＋＋：细菌75%凝集，凝集现象同上，上层液稍混浊。

＋＋：细菌50%凝集，管底有中等量沉淀，上层液半透明。

＋：细菌25%凝集，管底有少量沉淀，上层液混浊，不透明。

－：无凝集现象，液体完全混浊。

但细菌呈圆点状沉于管底，振荡时均匀混浊。

表1～1 试管凝集反应表
单位:mL
1．15
＋”判定为疑似。

羊1：50 “＋＋”或以上判定为阳性，1：25 “＋＋”判定
为疑似。

疑似反应家畜，再过半个月重检。

仍可疑，则依畜群中有阳性畜定性。

2．玻板凝集试验
（1）操作方法：取洁净玻板一块，用蜡笔划成4个约3cm2方格，用0.2 ml
吸管吸取被检血清分别滴加0.08ml，0.04ml，0.02ml，0.01m于1～4个方格内，
然后在每个方格中加入布氏杆菌玻板凝集抗原0.03ml。

每格用1根牙签分别从
0.01至0.08血清量依次搅拌混匀。

如表1～2。

表1～2 平板凝集反应表单位:ml 方格号 1 2 3 4 阳性血清对照阴性血清对照抗原对照
被检血清（ml） 0.08 0.04 0.02 0.01 阳性血清0.03 阴性血清0.03 生理盐水0.03 平板抗原（ml） 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03
相当于试管凝集价 1：25 1：50 1：100 1：200
判定结果
（2）结果判定
＋＋＋＋:细菌100%凝集，出现大凝集片或小的颗粒，液体完全清亮透明。

＋＋＋：细菌75%凝集，有明显的凝集片，液体基本透明。

＋＋：细菌50%凝集，有可见的凝集片，液体不太透明。

＋：细菌25%凝集，仅有可见的颗粒物，液体混浊。

－：无凝集现象，液体均匀混浊。

（3）判定标准
玻板凝集试验0.08ml，0.04ml，0.02ml，0.01m血清量相当于试管凝集试验
1：25，1：50，1：100，1：200，的凝集价，判定标准参照试管凝集试验。

二．变态反应布氏杆菌水解素皮内注射变态反应，用于绵羊和山羊布氏杆菌
病的检疫。

1．试验方法在羊尾根皱褶或肘关节后方无毛处，用酒精棉球消毒后，皮内注
射0.2 ml布氏杆菌水解素，注射后24h、48h各检查一次。

以反应最强的一次作
为判定依据。

2．判定标准
阳性反应(＋)：注射部位明显水肿，肉眼可见者。

可疑反应（±）：肿胀不明显，通过触诊和与对侧比较来判断。

阴性反应（－）：注射部位无反应或仅有个小的硬结者。

【实训报告】将操作情况和观察结果写一份实训报告。

牛羊布氏杆菌病血清学诊断考核方案。