酵母双杂交系统的应用 分析已知蛋白之间的相互作用 对蛋白质功能域的分析 分析未知蛋白相互作用 绘制蛋白质相互作用系统图 在药物设计中的应用
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三 种 印 迹 技 术 的 比 较
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实时PCR技术原理 实时PCR技术原理 PCR
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(略 )
第六节 遗传修饰动物模型的建立及应用 The establishment and application of heredityhereditymodified animal model
一. 转基因技术
采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎 干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。 干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。
医本<生物化学> 医本<生物化学>周爱儒 第六版
第二十二章 常用分子生物学技术的原理 及其应用
The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application
第一节
分子杂交与印迹技术
Molecular Hybridization and Blotting 库
是指一个包含了 某一生物体全部DNA 某一生物体全部 序列的克相关基因的克隆与鉴定 Cloning and identification of disease relative gene
分子杂交(nucleic acid hybridization) 一. 分子杂交
不同来源的单链核酸经退火形成双链结构的过程。 不同来源的单链核酸经退火形成双链结构的过程。
DNA DNA DNA RNA
基础：核酸的变性与退火 基础：
核酸探针(probe):标记的 标记的DNA或RNA 二. 核酸探针 或
杂交及印迹技术的意义: 亲缘关系分析, 杂交及印迹技术的意义 亲缘关系分析 遗传病分析等
第二节 PCR技术的原理与应用 PCR技术的原理与应用 Polymerase chain reaction
一. 聚合酶链式反应(polymerase chain
reaction, PCR)
全称为聚合酶链反应,是一种对特定的DNA片 全称为聚合酶链反应,是一种对特定的DNA片 DNA 段在体外进行快速扩增的技术,可以将微量 段在体外进行快速扩增的技术, 目的DNA片段扩增一百万倍以上。 目的DNA片段扩增一百万倍以上。 DNA片段扩增一百万倍以上
四. PCR的主要用途 的主要用途
目的基因的克隆 基因的体外突变 DNA和RNA的微量分析 和 的微量分析 DNA序列测定 序列测定 基因突变分析
五. PCR特点 特点
快速、特异、灵敏、简便。可用于极微量， 快速、特异、灵敏、简便。可用于极微量， 甚至单个 DNA模板的体外分子克隆。 模板的体外分子克隆。 模板的体外分子克隆
将在凝胶中分离的生物大分子转移(印迹 或直 将在凝胶中分离的生物大分子转移 印迹)或直 印迹 接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。 接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。
链接 DNA印迹技术 印迹技术(Southern bloting) 印迹技术 RNA印迹技术 印迹技术(Northern bloting) 印迹技术 蛋白质印迹技术(Western bloting) 蛋白质印迹技术 链接 其它: 斑点印迹、 其它 斑点印迹、原位杂交 、DNA chip。 。
二. 核转移技术
即动物整体克隆技术，将动物体细胞核 全部导入另一 即动物整体克隆技术， 个体的去核的受精卵内，使之发育成个体。 个体的去核的受精卵内，使之发育成个体。
三. 基因剔除技术
也称基因靶向灭活。 也称基因靶向灭活。
第七节 生物芯片技术 Biological chip technology
第八节 蛋白质相互作用研究技术 Research technology of interaction of protein
几种重要的PCR技术： 技术： 几种重要的 技术 RT-PCR、原位PCR、实时 、原位 、实时PCR。 。
反向PCR, 多重 多重PCR, 定量 定量PCR, 免疫 免疫PCR， （锚定PCR, 反向 锚定 ， 以及具前沿性的简并PCR技术，DDRT-PCR，AP-PCR， 技术， 以及具前沿性的简并 技术 ， ， RFLP-PCR，IS-PCR等） ， 等
一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或 一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或 荧光染料标记 全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的 全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在 膜上的 核酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 核酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。
三.印迹技术 印迹技术
Taq DNA聚合酶 聚合酶
二、PCR的基本反应步骤 PCR的基本反应步骤 变性
95˚C
2n
延伸 7： 三. PCR体系基本组成： 体系基本组成 模板DNA 模板 特异性引物 耐热DNA聚合酶 耐热 聚合酶 底物dNTPs 底物 Mg2+
一对引物决定了所扩增的DNA的区域。 的区域。 一对引物决定了所扩增的 的区域
第三节 核酸序列分析 Nucleic acid sequence analysis
核苷酸序列分析
1. Sanger双脱氧核苷酸末端终止法 双脱氧核苷酸末端终止法 双脱氧核苷酸末端 链接 原料：单链模板DNA 原料：单链模板 引物 * DNA聚合酶Ⅰ 聚合酶Ⅰ 聚合酶 底物* 底物 ：dATP、 dGTP、 dCTP、 dTTP 、 、 、 ddNTP 2. 序列分析的自动化 链接