制备待克隆的靶基因
PCR（来源培养细胞或组织、植物的mRNAcDNA）
RT-PCR
质粒中已克隆的目的片段、细胞培养
动物细胞
植物细胞
原代细胞培养
传代细胞培养
探讨功能：
与细胞生长、增殖、凋亡的关系，检测mRNA、蛋白质的表达变化及意义
内源基因：或使内源基因表达抑制（antisence，RNAi）或缺失、突变
免疫荧光双标记图像分析
检测表达
Protein
（tissues or cells -Western blot or immunohistochemistry，serum orconditionalmedium–ELISA）
Reporter gene
RT-PCR，Real-time PCR
Gene chips: cDNA, MicroRNA
外源基因：通过transfection（基因转染）、电转移、显微微注射等方法将外源基因导入培养的细胞中过表达（overexpression），在mRNA、蛋白质水平上表达上调（up-regulation）
信号传导：protein-protein interaction
Western blot immunoprecipitation
Hybridization（DNA-Southern blot，RNA-Northern blot，tissues or cells -in situ）
BrdU,Flow Cytometry（cell cycle，apoptosis）
常用的分子生物学内容和相关技术
一、 分子克隆（分子操作）
1． 原核表达系统（PET28a，PET30a等）
融合蛋白抗原免疫动物
原核表达系统蛋白转导系统（TAT）
2．真核表达系统（pcDNA3）：用于transfection（基因转染）
在培养的动物细胞中
分子克隆的方法：
选择合适的表达载体
选择酶切位点，设计PCR引物并合成