免疫共沉淀实验方案
一、实验试剂和材料
Dynabeads® Protein G(novex by life technologies)
PBS pH7.4(含0.01%Tween-20)
0.1M Na-phosphate（Washing Buffer）
50mM Glycine pH2.8(Elution Buffer)
二、实验步骤
（一）准备磁珠
1.将瓶子倾斜旋转5min左右，使瓶中磁珠悬浮；
2.吸取50ul磁珠液于离心管中；
3.将离心管置于磁铁架上，磁珠吸附到管壁上，弃上清；
4.从磁铁架上取下离心管；
（二）结合抗体
1.加入200ul用PBS(含0.01%Tween-20)稀释的抗体；
2.室温旋转孵育10min;
3.将离心管置于磁铁架上，磁珠吸附到管壁上，弃上清；
4.从磁铁架上取下离心管，用200ul PBS(含0.01%Tween-20)温和吹吸并重悬磁珠-抗体复合体；
（三）免疫沉淀抗原
1.将离心管置于磁铁架上，磁珠吸附到管壁上，弃上清；
2.从磁铁架上取下离心管，加入抗原样品并温和吹吸，重悬磁珠-抗体复合物；
3.室温旋转孵育10min，使抗原结合到磁珠-抗体复合物上;
4.将离心管置于磁铁架上，磁珠吸附到管壁上，弃上清；
5.用washing buffer 3次洗涤磁珠-抗体-抗原复合物，弃上清；
6.用100ul washing buffer重悬磁珠-抗体-抗原复合物，并将磁珠悬浮液转移到干净的离心管中，以避免蛋白抗原粘附在管壁上。

（四）洗脱抗原
1.将离心管置于磁铁架上，磁珠吸附到管壁上，弃上清；
2.加入200ul Elution Buffer至离心管中，温和吹吸并重悬磁珠-抗体-抗原复合物；（不要吹打出气泡）
3.室温旋转孵育2min；
4.将离心管置于磁铁架上，并将洗脱液（含有洗脱的抗原、抗体）转移到干净的离心管中，用于后续的SDS-PAGE蛋白凝胶电泳分析。