养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养
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一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
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二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
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三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
（二）采样点的选择 注意样品的代表性，河水、湖水、地下水、自来水 （三）采样器具 采样瓶、自动采样器、容器可加硫代硫酸钠
（四）样品送检及注意事项 4h内检验、可冷藏
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五、消毒及卫生用品
（一）医疗卫生机构消毒及卫生用品 物表 ：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2 区域 空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设
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第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
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一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
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大肠杆菌革兰染色阴性
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金黄色葡萄球菌革兰染色阳性
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变形杆菌周身鞭毛
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绿脓杆菌单鞭毛
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肺炎链球菌荚膜
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23Байду номын сангаас
钩端螺旋体
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霍乱弧菌
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破伤风芽胞杆菌
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第三节 细菌的分离培养方法
所谓细菌的分离培养就是提供某细菌生长所需的各种条 件（营养、温度、湿度、酸碱度和气体），将其从微生 物混合物中培养出来的方法。
细菌学检验
细菌学检验基本技术
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第一节 样本的采集与送检
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
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一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
一条对角线上内、中、外3点；面积 ＞ 30m2，设4 角及中央5点，暴皿5min；或用采样器 手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板 医疗用品：破坏、棉拭子 消毒剂：1ml加至9ml中和剂中
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五、消毒及卫生用品
（二）一次性使用的卫生用品 同一批号3个运输包装中至少随机抽取12个最小包装
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六、空气样本
按照流量的有效数字分，3位数以上为大流量(≥500 L/min)，2~3位数为中流量(499L/min～11 L/min)，1 位数为小流量(≤10L/min)。
按照采样器所用介质性质又可分为固体及液体采样器。 按采样器的工作原理可分为六种：撞击式、沉降式、过
滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。
童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量， 分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1 ml～2 ml。 4. 样本的送检：尽快，室温 5. 注意事项：同时需氧和厌氧培养
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一、临床样本的采集与送检
（二）尿液样本的采集 1. 采样时间：晨尿、用药前
2. 采样方法：10ml，中段尿、肾盂尿、导尿 3. 注意事项：无菌操作，用药前 （三）粪便样本的采集 1. 采样时间：急性期、新鲜粪便 2. 采样方法：自然排便、直肠拭子、Cary-Blair运送培
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六、空气样本
（二）空气中细菌等微生物采样的介质 采样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏附、
保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十 二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白) （三）空气中细菌等微生物采样方法及送检 1. 平板沉降法：参见医院空气采样规定。 2. 空气采样器采样：常用Andersen采样器
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一、临床样本的采集与送检
（五）其它临床样本 化脓和创伤样本：棉拭子 脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液
等：穿刺 生殖道：棉拭子 组织样本：内镜 炎症或组织坏死部位：手术
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四、生活饮用水细菌学检验样本
（一）水样采集
许多水体随时间和空间会发生很大变化，要采集具有代 表性的样品，必须定出合理的采样规划。
2、暗视野显微镜(dark-field microscope)：具有暗视野 聚光器，用于观察不染色标本活菌的形态、运动方式。
3、相差显微镜(phase contrast microscope)：具有环状光 栅聚光器和相差物镜，既可观察活体细胞的外形和运动 方式，又能观察其内部细微结构及这些结构的数量。
量；1/4用于检测、1/4用于留样、2/4就地封存准备复 测。
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六、空气样本
平板沉降法和采样器采集法 （一）空气微生物采样器分类 按照采样方式的不同可分为两类(Ⅰ和Ⅱ类)，Ⅰ类是将
微生物直接采到固体培养基上(如Andersen采样器)， Ⅱ类是把微生物先采到液体或其它介质上，再转种到培 养基或细胞上显示(如Porton采样器)。
在细菌的分离培养过程中，必须采用无菌技术或称无菌 操作。
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一、培养基的制备
（一）培养基的种类： 1. 按用途分类
基础培养基：仅最基本的营养成分。 营养培养基：在基础培养基上加入葡萄糖、血液、血清等。 增菌培养基：多为液体培养基，一般含有抑制剂，且是具有