三、革兰染色法（自做）
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实验室规则
微生物学实验要求 1、微生物无处不在：故要树立有菌观念，实验过程要无菌操
作; 2、实验材料为病原微生物，具有感染性
1）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他 个人用品不得带入实验室；
2）实验室禁止饮食，未经许可严禁将实验材料带出实验室
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3、按照实验要求，认真积极的完成实验，有些实验需第二 天观察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完 成实验报告；
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变形杆菌（示鞭毛）
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
鞭毛 菌体
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3. 芽 胞
• 概念 • 形状、直径、位置随菌种而不同 • 形成条件 • 非细菌的繁殖体 • 抵抗力强 • 医学意义：
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芽胞 菌体
破伤风梭菌（示芽胞）
取材：纯培养物
染色法：革兰染色
放大倍数：10X100
4、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室 仪器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元/张；
5、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负 责关门、关窗、关水、关电。
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一、显微镜的使用操作及注意事项
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Байду номын сангаас
二、 显 微 镜 的 使 用
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（一）观察前准备
1. 显微镜拿取
2. 调节通光量
2．杆菌： 大肠杆菌、枯草杆菌等
3．螺形菌： 霍乱弧菌等
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（二）细菌的特殊结构
1. 荚 膜
• 荚膜与微荚膜概念 • 化学成分 • 变异 • 医学意义
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肺炎链球菌（示荚膜）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
荚膜 菌体
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2. 鞭 毛（Flagllum）
• 概念 • 数目、位置和排列可不同 • 鞭毛是细菌的运动器官 • 医学意义：
《医学微生物学》实验课件
南华大学病原学实验教学中心 Etiology Experimental Teaching Center
of University of South China
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实验内容
一、显微镜的使用操作及注意事项 二、细菌的形态和特殊结构观察：
1.自阅片：破伤风杆菌（示芽胞）、变形杆菌（示鞭毛） 2. 示教片：肺炎链球菌（示荚膜）
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4.玻片处理 5.镜头擦拭：限取3张擦镜纸
注意
---如香柏油不慎玷污非油浸镜头应立即直接拭去 （勿用二甲苯） ---擦拭时沿一个方向，禁止旋转
6.还原各部分 7.填写显微镜使用登记表
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二、细菌的形态和特殊结构观察
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（一） 细菌的基本形态
1．球菌： 葡萄球菌(葡萄状排列) 链球菌 (链状排列) 脑膜炎奈瑟菌(成双排列)
使用油镜时，为使通光量最大，可采用： 1）光圈开到最大； 2）聚光器上升到最高； 3）低倍（10×）物镜下，转动凹面反光镜，使视野的 光照达到最明亮 均匀。
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（二）低倍镜观察
操作要点 粗旋钮调节：物像出现
细旋钮调节：物像清晰 为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察？
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（三）高倍镜观察
操作要点
在低倍镜转换高倍镜（40x ）
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4. 菌 毛
• 概念 • 在光镜下看不见，使用电镜才能观察到 • 分类：普通菌毛和性菌毛 • 医学意义
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三、革兰氏染色法
常用染色方法
单染法： 一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；
复染法： 两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，
如革兰染色法和抗酸染色法。
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【原理】
渗透性学说：两类细菌的细胞壁成分和结构差异
G+菌：
肽聚糖多 交联度大
类脂质少
结晶紫 卢戈碘液液
酒精 复红
G-菌： 类脂质多 肽聚糖少
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【材料】
1. 葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。 2. 革兰染色液。
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【步骤】
涂片：注意无菌操作
干燥 固定 染色
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初染：结晶紫染液染 lmin
水洗，甩干
媒染：卢戈氏碘液染1min
染
水洗，甩干
色
脱色： 酒精脱色约30s 关键步骤！
水洗，甩干
复染： 复红染液染1min
水洗，甩干
印干
油镜观检 25
【结果】
革兰阳性球菌
革兰染色结果 取材：培养混合菌液 放大倍数：100X10
革兰阴性杆菌
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作业
1、细菌特殊结构绘图 2、革兰染色法的完全实验报告（实验名称、目的、
材料、步骤、结果、分析、结论）
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个人观点供参考，欢迎讨论！
适当调节细螺旋即可看到物像
注意 忌使用粗螺旋，否则极易压碎标本．甚 至损坏物镜。
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（四）油镜观察
1.滴油（不要抹开） 2.转换为油镜头，使其浸入香柏油 3.调节细螺旋即可找到物像
注意 油镜头须浸入油中
不使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转，否则可压 碎玻片及损坏物镜头
光圈需开至最大 聚光器须上升至最高