肾穿病理报告的流程
制片流程
以上四种染色可穿插同步进行,以标本数10 例为例,染色总时间约为 200 min,超出10例 标本,切片时间递增,染色时间倍增.
制片流程
至下午五点左右制片过程全部结束,出片。 周二穿刺,周三下午五点左右出片; 周四穿刺,周五下午五点左右出片;
免疫标记流程
周二穿刺标本在周四上午进行免疫荧光染色。 周四穿刺标本在周五上午进行免疫荧光染色。 周五下午所有标本荧光拍照。
荡2h; (10)纯包埋剂渗透组织,并震荡2 h; (11)纯包埋剂包埋:纯包埋剂包埋组织并置于聚合器中聚合
37°C烘箱,24 h;
电镜检查
周五:继续聚合,调烘箱温度至45°C, 24 h;
周六:继续聚合,调烘箱温度至60°C, 48h至周日;
免疫标记流程
1、免疫荧光:
1.1直接免疫荧光:冰冻切片室温放置20min,一抗室温孵 育1h,洗片5min×3,晾干甘油封片,总计时间约2 h。
1.2间接免疫荧光:冰冻切片室温放置20min,一抗室温孵 育1h,洗片5min×3,二抗室温孵育1 h,总计时间为2.5 h
免疫标记流程
2、免疫组化:
制片流程
PAS染色步骤
1. 切片脱蜡入水 30min 2. 1%高碘酸染 12min. 流水冲洗 2min 3. shiff液染到组织转淡红. 10-15min 4. 流水冲洗直至组织转枚红(镜下观察). 5min 5. 苏木素染核 3min. 水洗1min 6. 0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可) 7. 水洗蓝化(镜下观察). 5min 8. 从低浓度到高浓度酒精脱水. 20min 9. 二甲苯透明 20min 10. 树胶封片. 标记 10min 总时间 约 120 min
5 烤片30min 6 蜡块封存 总计约200min,至中午结束切片
制片流程
各种染色时间 从下午开始进行染色过程 HE染色步骤
1.切片脱蜡入水 30min 2.苏木素染核 10min. 水洗1min 3. 0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可) 4. 水洗蓝化(镜下观察). 5min 5. 80%酒精伊红染浆 10min. 6. 从低浓度到高浓度快速酒精脱水. 5min 7. 二甲苯透明. 20min 8.树胶封片. 标记 10min 总时间 约 95 min
制片流程
Masson染色步骤
1.切片脱蜡入水 30min 2.苏木素染核 1min. 水洗1min 3.0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可) 4.水洗蓝化(镜下观察). 5min 5.0.5%酸性品红+1.8%丽春红2R(1:1)染 30min.. 6.1%磷钼酸染 1min. 7.0.2%淡绿的0.2%醋酸液 1min左右. 8.0.5%醋酸快速洗. 9.从低浓度到高浓度酒精快速脱水. 2min 10..二甲苯透明. 20min 11.树胶封片. 标记 10min 总时间 约 95 min
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 制片流程
PASM染色步骤
1. 切片脱蜡入水 30min 2.混合染液预热 30min 3. 1%的高碘酸中染 12min. 流水冲洗 2min 4. 混合染液中染30min左右(镜下控制) 5. 0.2%氯化金过一下. (镜下控制) 6. 5%硫代硫酸钠染1min. 7. 苏木素染核5min. 流水冲洗 2min 8. 0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可) 9. 水洗蓝化(镜下观察). 5min 10. 80%酒精伊红染浆 8min. 11. 从低浓度到高浓度酒精快速脱水. 5min 12. 二甲苯透明. 20min 13. 树胶封片. 标记 10min 总时间 约 135 min
肾穿病理报告的流程
肾病实验室
制片流程
每周二、四下午肾穿,分别留取荧光及电镜 标本后,立即固定剩余标本。
所有穿刺结束后,组织放入包埋框并全部整 理到脱水篮,放入自动脱水机,机器在夜间 运行至第二天上午8点。
制片流程
组织脱水时间 福尔马林固定:120min 水洗:2min 75%酒精:20min 85%酒精:20min 90%酒精:20min 95%酒精:20min 无水乙醇:10min 无水乙醇:15min 二甲苯:10min 二甲苯:15min 石蜡I:30min 石蜡II:30min 石蜡III:45min 总时间约为360min,此步骤由自动脱水机在夜间运行。
周四上午制样: (1)组织标本2.5%戊二醛固定; (2)0.1 mol/L PBS 冲洗15 min×2次; (3)1%锇酸固定1 h; (4)0.1 mol/L PBS 15 min×2次; (5)2%醋酸铀水溶液染色30 min×1次 (6)30%,50%,70%,90%酒精依次脱水,各15 min×1次; (7)100%酒精脱水20 min1次,并振荡; (8)100%丙酮脱水20 min2,并振荡; (9)1:1渗透:无水丙酮与包埋剂按1:1体积混合渗透组织,并振
制片流程
组织包埋、切片步骤及时间:从第二天上午开始
以10例前期肾标本为例 1 标本由脱水机拿出 2 逐个包埋组织,冷台冷冻后取出组织块及修整蜡块及其他前期 准备
时间:60min 3 冷台冷冻 10min 4 切片 展片 捞片 标记
制片流程
前期肾标本,每例标本切24片,贴在8张载玻片上,其 中4张分别做HE,PAS,Masson,PASM, 2张常规备 用片,2张免疫组织化学片,每例标本约需10min,总 计时间约100min (移植肾标本免疫组织化学备片为 10张,每例切片时间延长约2min)
石蜡切片脱蜡30 min,抗原修复10 min,自然冷却1 h,一抗室温孵育1 h或4度过夜,洗片30 min,二抗 室温孵育30 min,洗片30 min,DAB显色,苏木素复 染细胞核,水洗蓝化,乙醇脱水,晾干封片总计时间 约5小时
电镜检查
每周三下午浙大电镜室派人来实验室取电镜 标本。
电镜检查