实验五 蒽酮法测定可溶性糖
2 标准曲线制作 取 6 支大试管，从 0 ~ 5 分别编号， 按下表 加入各试剂。 空白对照
管号 试剂 100 µ g/ml 葡萄糖溶液 （ ml ） 蒸馏水（ ml ） 蒽酮试剂（ ml ） 葡萄糖量（ µ ） g 0 0 1.0 5.0 0 1 0.2 0.8 5.0 20 2 0.4 0.6 5.0 40 3 0.6 0.4 5.0 60 4 0.8 0.2 5.0 80 5 1.0 0 5.0 100
植物生理学实验指导
试验一 小液流法测定植物组织水势
• 试验目的 了解测定植物组织水势的方法 • 原理 将植物放在已知水势的一系列溶液中， 如果组织的水势与溶液的水势不相等，则 组织吸水或失水或维持平衡，引起溶液的 浓度、密度、电导率等参数发生变化。然 后根据这些变化情况确定植物组织的水势。
试验一 小液流法测定植物组织水势
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
• 四、结果计算 可溶性糖(µ g/g)= (C×V1/V2)/W 式中： C —— 从标准曲线查得葡萄糖量， µ 。 g V1 ——样品提取液总体积，ml。 V2 ——显色时取样品液量， ml。 W ——样品重（ g ）。
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
• 【实验报告】 1、本法测定的可溶性糖包含哪些种类？提高 试验精确度要注意那些步骤？
器材与试剂 1、实验仪器 高级分光光度计，离心机，天平，剪 刀、研钵，漏斗，移液管，20ml棕色容量瓶；
试验二 叶绿素ab含量的测定
2、实验试剂 丙酮，碳酸钙 3、植物叶片：同一种植物的阴叶和阳叶； 实验步骤 1、色素的提取 取新鲜叶片0.5g，放入研钵，加入纯丙酮5ml，少许 碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加入80%丙酮 酸5ml，将匀浆移入离心管，并用适量80%丙酮清 洗研钵。5000rpm离心5分钟，取上清液用80%丙 酮定容至20ml
实验六 丙二醛（MDA）的测定
• 【实验作业】 • 比较正常状况下植物组织中的MDA含量与 逆境情况下的有何不同？
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
• 【实验材料、试剂与仪器设备】
（一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 葡萄糖标准溶液（ 100 µ g/ml ）：准 确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸 馏水并定容至 100 ml ，使用时再稀释 10 倍（ 100µ g/mL ）。
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
实验四 小篮子法测定呼吸强度
2. 实验试剂 ①0.05mol.L-1 Ba(OH)2； ②0.1%麝香草酚酞酒精溶液； ③1/44mol.L-1草酸溶液。重结晶草酸 2.8652g，蒸馏水定容至1000ml。 3. 实验材料 发芽的小麦种子或其它植物活体。
实验四 小篮子法测定呼吸强度
• 【实验步骤】 1. 实验装置
实验四 小篮子法测定呼吸强度
4. 对照测定：材料为沸水煮死的种子，其余 步骤同上； 5. 计算 呼吸强度(CO2，mg/g.h)=(v1-v0)/{种子鲜 重(g) ×时间(h)} ******本实验应按照分析化学实验的要求， 对每个实验步骤严格操作，才能有实验结 果！
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
Solar radiance (w.m )
-2
800
总辐射
600
400
200
0 0 500 1000 1500
-2 -1
2000
2500
光合有效辐射
PAR (umol photon.m .s )
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
3. 样品测定 取待测样品提取液 1.0 ml 加蒽酮试剂 5 ml ，同以上操作显色测定光 密度。重复 3 次。
试验一 小液流法测定植物组织水势
• 实验报告 • 1、实验的结果； • 2、产生误差的原因。
试验二 叶绿素ab含量的测定
• 实验目的 熟悉测定未经分离的叶绿素ab的方法与 计算； • 实验原理 叶绿素a和b分别在663nm和645nm处有 吸收峰；
Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663
试验二 叶绿素ab含量的测定
2、测定光密度 取上述色素提取液1ml，加 80%丙酮溶液4ml，转入比色杯中中，以 80%丙酮为对照，分别测定663和645nm时 的吸收值； 3、计算 实验报告 1、比较阴阳叶叶绿素ab的含量比值的差异。
实验三 改良半叶法植物光和强度测定
• 实验原理 将植物对称叶片的一部分遮光或 取下置于暗处，另一部分则进行光合作用， 过一定时间后，在这两部分叶片的对应部 位去同等面积，分别烘干称重。开始时视 为相等，照光后叶片重量超过暗中的重量， 超过部分即为光合产物的产量，并通过一 定的计算可得到光合作用强度。
2 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入 到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具 塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三） 仪器设备 分光光度计，分析天平，恒温水浴，试管， 三角瓶，移液管（ 5 、 1 、 0.5 ml ），剪刀，瓷 盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸,镊子。
• 器材与试剂 ①实验仪器：试管，移液管，毛细滴管，打 孔器，镊子； ②实验试剂：1.00 mol.L-1蔗糖溶液，甲烯蓝； ③实验材料：玉米、菠菜或其它植物叶片。 • 实验步骤 ①取8支试管，编号，配制0.1~0.8mol.L-1
试验一 小液流法测定植物组织水势
的溶液，加好塞子，作为对照组； ②另取8支试管，对应于对照组编号，然后从 对照组的试管中分别取4ml溶液移入对应编号 的试验组试管中，加塞； ③用打孔器在叶片上打孔，随机取样，向试 验组的每一试管中放入20片，加塞，放置30 分钟，其间摇动数次。到时间后，用大头针 沾取少许甲烯蓝粉末加入每一试验试管。
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
• 【实验步骤】 1 样品中可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，摖净表面污物，剪碎 混匀，称取新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g （或干样 粉末 5 ～ 100 mg ），放入大试管中，加 入 15 ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min （为什么？），取出冷却，过滤入 100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容 至刻度。
试验一 小液流法测定植物组织水势
④用8支毛细滴管从试验组的各管中依次吸取 少许着色的液体少许，缓慢插入对照组相应 试管的中部，缓慢横向放出一滴溶液，观察 蓝色液滴的移动方向。 液滴向上运动——说明？ 液滴向下运动——说明？ 液滴静止不动——说明？ ——蔗糖溶液的密度大于纯水的密度！
试验一 小液流法测定植物组织水势
实验六 丙二醛（MDA）的测定
• 【实验目的】熟悉测定MDA的常用方法； • 【实验原理】植物遭遇逆境，丙二醛含量升高； 1. 丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）在酸性和高温条 件下呈红色，在532nm处有吸收峰；
• TBA与可溶性糖同样能反应，在450nm处有吸收峰； 2. 加入低浓度的Fe3+，增加450nm的糖吸收； 提取液C糖/（mmol/L）=11.71OD450 提取液C醛/（μmol/L）=6.45OD532-0.560OD450
• 【实验原理】 糖在浓硫酸作用下生成的糠醛或羟甲基糠醛 与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围 内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖 的定量测定。 由于反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单 糖，因此，蒽酮法能测出溶液中全部可溶性碳水 化合物总量。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区 的吸收峰为 620 nm 。
实验五 蒽酮法测定可溶性糖
• 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空 白调零测定光密度，以光密度为纵坐标， 含葡萄糖量（µ ）为横坐标绘制标准曲线。 g
1200
Solar=-7.98018 + 0.50802 * PAR(P<0.0001)
1000
实验三 改良半叶法植物光和强度测 定
• 器材与试剂
1、仪器 2、试剂 三氯乙酸（10%） 3、代表性植物叶片
• 实验步骤 1、选择测定样品 选择光照条件好、叶龄一致的 叶片20片，编号。 2、叶基部处理 用5%三氯乙酸处理叶柄基部。
实验三 改良半叶法植物光和强度测 定
注意：可见灼伤，但叶片姿势保持不变。 时间（精确到分钟）；剪取时 注意不要伤及主脉。 样品用湿纱布保存，置于4℃暗处保存。 4、光和后取样 4~5小时候，取样，方法同上
实验三 改良半叶法植物光和强度测 定
• 5、称重比较 测定打孔器面积；每叶片打孔15片。分别 置于不同的培养皿中。80℃烘干至恒重， 称重。 • 6、计算结果 • A=干重增加数（mg）/(叶面积*光照时数)
实验四 小篮子法测定呼吸强度
• 【实验原理】 利用Ba(OH)2溶液吸收呼吸过程中释放 的CO2，试验结束时，用草酸溶液滴定残留 的Ba(OH)2，从空白和样品两者消耗草酸溶 液之差，计算出呼吸过程中释放的CO2。 • 【器材与仪器】 1. 实验仪器 广口瓶，温度计，酸式滴定管， 干燥管，尼龙网制小篮。
• • • • • • • • ⑤计算叶片细胞的水势 Фcell= Фout=-icRT; 其中：Фcell为植物细胞水势； Фout为外界溶液渗透式； i为解离系数，蔗糖为1； c为液体浓度（mol.L-1）； R为摩尔气体常数，0.083×105 L.Pa/mol.K T绝对温度值，=t℃+273
实验四 小篮子法测定呼吸强度
2. 称取萌发的小麦种子15.00g，装于小篮内， 然后将小蓝挂于广口瓶内，同时加入25.0 ml Ba(OH)2溶液，立即塞紧瓶塞，并用融 化的石蜡密封瓶口；每隔10分钟，轻轻摇 动广口瓶。 注意：勿让小篮侵入溶液中！！！！！！
实验四 小篮子法测定呼吸强度
3. 1h后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮，加 入2滴指示剂，立即重新塞紧瓶塞。然后拔 出小橡皮塞，经滴定管插入小孔中，用草 酸滴定，直到蓝绿色变成无色为止。记录 滴定所含用的草酸溶液的体积（ml）数。