实验流程
洋葱鳞茎内表皮 ↓
置于已滴MP-染液的载玻片上染色1min ↓
洗去浮色 ↓
制片镜检
实验结果
• 细胞核呈绿色或蓝绿色 • 细胞质和核仁呈粉红色
染料说明
N(CH3)3
(H3C)2N
O
N(CH3)2
(H3C)2N
C
N(CH3)2
甲基绿(methyl green)
C H
派洛宁(pytonin)
洋葱表皮细胞Unna反应
实验原理
孚尔根反应显示脱氧核糖核酸
主要包括DNA解离和显色两个步骤：标本 经稀盐酸解离后（1mol/L HCL, 60oC ） ，DNA 分子中的嘌呤碱基与脱氧核糖连接的键 被打开，从而在脱氧核糖的一端形成了 游离的醛基。 Schiff试剂中的无色品红 可与醛基反应， 形成含有醌基的化合物 (紫红色) ，从而显示出DNA的分布 。 通过显微分光光度计亦可做定量分析。
O
+C
H
R
水解后形
成有醛基
的DNA
R
R
H C OH
H C OH
OSO
O
SO
NH
NH
Cห้องสมุดไป่ตู้
NH
紫红色化合物
实验结果
• 细胞核的DNA被染成紫红色, 其主要分布于染色质(或染 色体)内,核仁和细胞质被亮 绿复染成绿色.
实验原理
甲基绿-派洛宁染色方法
细胞经甲基绿-派洛宁染液处理后,其中的 DNA和RNA出现不同的呈色反应. 一般认为 这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料甲 基绿和派洛宁具有亲和力，但因此两种染 料所带电荷密度不同，当pH4.6 时与核酸 发生竞争性结合，具高电荷密度的甲基绿 将高聚分子的DNA染成蓝绿色，具低电荷密 度的派洛宁将低聚分子的RNA染成粉红色. 由此可对细胞中的DNA和RNA进行定位、定 性和定量分析。
Feulgen反应示DNA
Feulgen反应示DNA
实验报告要求
摘要及关键词 前言 材料和方法 结果与分析 参考文献
实验材料及试剂
仪器：显微镜 水浴锅 材料：洋葱鳞茎；大蒜根尖 试剂：MP染液；
蒸馏水； 5%三氯乙酸； 1N HCl； Schiff 试剂； 亚硫酸水； 0.1%亮绿
实验流程
蒸馏水 （CK 2 ）
大蒜根尖 (经Carnoy固定液固定)
70%乙醇 1N HCl1~2min 1N HCl 60oC 8min
实验八 细胞内核酸 的显色与分布
孚尔根反应显示脱氧核糖核酸 Unna反应鉴定两种核酸在细胞内的分布
（必做， 综合实验, 6学时）
实验目的
掌握原位显示细胞内核酸的 细胞化学方法和原理
➢ 掌握Feulgen DNA reaction方法和原理
概述
核酸的细胞化学显示方法
核酸是细胞中的重要组分, 主要包括DNA和 RNA。DNA是遗传信息的载体（细胞核）, RNA 传递DNA的遗传信息， 指导细胞合成各种蛋 白质。
蒸馏水 Schiff反应(避光30min) 亚硫酸氢钠溶液(1~2min) 亚硫酸氢钠溶液(1~2min)
蒸馏水 0.1%亮绿（30~40s)
制片镜检
5%三氯乙酸 90oC,15min （CK 1 ）
大蒜根尖的培养
Feulgen 反应(示意)
H OSO
NH
H OSO
NH
C SO3H
NH2
Schiff 试剂
1924年(Feulgen and Rossenbeck)发明了显示DNA的特 异反应 (Feulgen DNA reaction) ，对DNA的显示具有 高度的专一性。
1940年(Brachet)发明了甲基绿-派洛宁染色方法 (Methyl Green-Pytonin method) 用以区别细胞中的DNA和 RNA。