/bio101
转 基 因 显 微 操 作 过 程
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
8、透射电子显微镜 TEM
TEM LIGHT PATHWAY
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
6、倒置显微镜 inverse microscope
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
7、显微操作仪
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
四、实验方法
• （一）线粒体的超活染色与观察 • 1 ．口腔上皮细胞线粒体的超活染色 • 1/5000詹纳斯绿Ｂ1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取）， 载玻片于３７℃恒温染色10-15min，显微镜下观察． • 2 ．洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 • 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片 于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察． • （二） 绿豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察 • 初生绿豆幼苗根尖（１－２cm）纵切面切片，1/3000中 性红溶液１滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖 上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察．
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
实验一、光学显微镜使用 及显微摄影技术
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bbs
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
实验二 细胞凝集反应 细胞膜的渗透性
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
细胞生物学实验技术
绍兴文理学院生物科学系
生物秀—专心做生物！ 易生物-领先的生物医药商务平台 生物秀论坛-学术交流,资源共享,互助社区 /bbs/
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
/bio101
二、传统胶片显微摄影过程
• • • • • • • • • • • • • • • 显微摄影装置的安装与调试 ↓ 显微镜的光路调整 ↓ 装入胶片 ↓ 取景聚焦 ↓ 暴光: 1/15sec(应先测光:绿灯亮可以正确暴光) ↓ 黑白胶片的冲洗:显影 3min→停显 10sec→定影 15min→水洗:流水冲洗30min →晾干 ↓ 印相放大:取景聚焦→暴光→显影 →停显 10sec→定影 15min→水洗:流水冲 洗30min ↓ 上光剪切
– 土豆凝集素１滴、２％鸭血红细胞液１滴 – 载玻片上混匀，静置２０min，
• 3 ．细胞凝集反应
• 4 ．对照
– PBS１滴、２％鸭血红细胞液１滴
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
/bio101
2、荧光显微镜 Fluorescence microscope
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
/bio101
一、实验目的
• 1．了解显微镜各部分的名称、结构和功 能，学习普通光学显微镜、暗视野显微 镜、相差显微镜、荧光显微镜、微分干涉 差显微镜、倒置显微镜、显微操作仪等的 构造和使用方法。 • 2 ．掌握显微摄影的基本方法，学会显微镜 的视差校正，曝光控制
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
用途：观察未经染色的玻片标本
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
/bio101
三、实验用品
• 1 ．器材： • 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、 载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 • 2 ．试剂： • Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红 • 3 ．材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细 胞、绿豆幼根根尖
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE，TEM
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
两个最近可分辨光点的爱里圆盘
•思考：如何提高显微镜的分辨能力？
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
• 1、细胞凝集反应 • 凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与 细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 • 2、细胞膜的渗透性 • 在低渗液中，细胞很快吸水而胀裂，称为溶血。 在等渗液中，由于有些溶质会进入红细胞内、引 起细胞渗透压升高，细胞也会吸水胀裂，由于各 种物质透入细胞的速度不同，溶血的时间不同。
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
3、暗视野显微镜 dark field microscope
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
4、相差显微镜
四、实验步骤
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
• (一) 细胞凝集反应 • 1 ． ２％鸭血红细胞悬液制备 • 新鲜鸭血加抗凝剂，生理盐水洗５次，每次２０００ r/min，离心５min，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸭 血红细胞悬液。 • 2 ．土豆凝集素制备 • 土豆２克，加１０ml PBS，浸泡２h
/bio101
一、实验目的
• 1 ．了解细胞膜的表面结构； • 2 ．了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细 胞膜的速度。
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
二、实验的原理
生物秀论坛——学术交流、资源道——生命科学实验中心
/bio101
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
三、实验用品
• 1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心 管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 • 2 ．材料: 土豆块茎 • 3 ．试剂: ２％鸭血红细胞、抗凝血剂、PBS、土 豆块茎、0.17mol/L氯化钠和其他等渗液。
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
分辨力等于光点爱里圆盘的半径
R=0.61λ/N．A． 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2，n= 介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。
二、实验原理
• 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是 由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染 料始终保持氧化状态(即有色状态),呈蓝绿色。 • 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中 的液泡系染成红色。
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
• （二）细胞膜的渗透性 • 1 ．低渗溶液 • 试管一支：
– 鸭血红细胞液 １ml – 蒸馏水 10ml – 结果溶血，溶液变透明
• 2 ．等渗溶液
– 0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸 铵、0.17mol/L硝酸铵、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L 硫酸铵、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、 0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮等８种溶液进行同样实 验，步骤同上。
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
5、微分干涉差显微镜
• Differential interference contrast （DIC） • 1952年Nomarski发明。 microscope
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
/bbs
生物秀实验频道——生命科学实验中心
/bio101
1 、 普 通 光 学 显 微 镜
生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区
/bbs