1、旋光仪
从光源(1)射出的光线，通过聚光镜(3)、滤色镜 (4)经起偏镜(5)成为平面偏振光，在半波片(6)处产生 三分视场。通过检偏镜(8)及物、目镜组(9)可以观察 到如图所示的三种情况。转动检偏镜，只有在零度时 （仪器出厂前调整好）视场中三部分亮度一致（如下 图）。
a.大于（或小于）零度的视场 b.零度视场 c.小于（或大于）零度视场
先加1 mL30％的硫酸锌溶液，充分混匀； 再加入1 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀并全部转 移至 100 mL容量瓶中，用少量蒸馏水将锥形瓶冲洗几次； 若泡沫过多，加几滴无水乙醇消泡； 用蒸馏水定容至刻度； 混匀后过滤，弃去初始滤液15 mL，收集其余滤液 充分混匀； 进行旋光测定。
四、结果处理
淀粉含量
三、操作方法
取3个25mL的锥形瓶，编号； 向第1、2号瓶内各加入0.1mol/L的标准甘氨酸溶
液2mL和水5mL，混匀；向3号瓶内加入7mL水。 然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各
加2mL甲醛溶液再混匀； 分别用0.1mol/L标准氢氧化钠的溶液滴定至溶液
显微红色
• 重复以上实验3次，记录每次每瓶消耗标准氢氧 化钠溶液的毫升数。取平均值,用于计算甘氨酸氨 基氮的回收率。 • 取未知浓度的甘氨酸溶液2mL，依上述方法进行 测定，平行三次，取平均值,用于计算每毫升甘氨 酸溶液中含有氨基氮的毫克数。
R C COO N（CH2OH）二2 羟甲基氨基酸
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果 可算出氨基氮的含量。
如样品是多种氨基酸的混合物如蛋白水解液，则 滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
此法简便快捷，常用来测定蛋白质的水解程度， 随水解程度的增加滴定值增加，滴定值不再增加时， 表示水解作用已完全。
四、结果
甘氨酸氨基氮的回收率：
甘氨基酸氨基氮回收率
（%）
实际测得量 加入理论量
100
公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧 化钠溶液的毫升数。取平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧 化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘 以14.008。2mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘以14.008 即为加入理论量的毫克数。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟 甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3+释放H+，使溶 液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色范围内（ pH9.0左右）。因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧 化钠溶液滴定。
R C COOH +NH3
R C COO
HO
NH2
+ H+
中和
HCHO
R C COO NHCH2OH 羟甲基氨基酸 HCHO
每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数:
氨基氮（mg / mL) (V1 V2 ) cNaOH 14.008 2
V1为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数 V2为滴定对照液（3号瓶）耗用标准 氢氧化钠溶液的 平均毫升数。 CNaOH为标准氢氧化钠溶液的浓度。
五、思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么? 2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的-NH3+基上的H+，
α100
α2D0 l m
100 %
式中 α—测得的旋光度； [α] —淀粉的比旋光度（见下表）
l—旋光管长度（dm）； m—样品质量（g）
说明： （1）实验中，沸水浴要备有足量的水；
要用定时钟准确记时。 （2）提前打开旋光仪，使其进入稳定的
工作状态。
五、思考题
样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或 多于15min会对测定结果分别产生什 么影响？
不能用一般的酸碱指示剂？
实验3 蛋白质含量测定—双缩脲法
一、目的与要求
1. 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。 2. 复习巩固7200型分光光度计的操作，并了解其
基本结构。
二、实验原理
蛋白质分子中含有多个与双缩脲结构相似的酰胺 键，也具有这一反应
反应产物在540nm处有最大光吸收
颜色的深浅与蛋白质（或多肽）的浓度呈正比， 而与蛋白质的分子量及氨基酸的种类无关
三、操作方法
1. 样品制备 称取粉碎过40目筛的（玉米）样品2.50 g（精确至
0.01 g）放入100 mL锥形瓶中； 沿器壁缓慢加入50 mL l％的盐酸溶液，并轻轻摇动
使全部样品润湿； 将锥形瓶放入沸水浴中，预热3min，在沸水中准确
加热15min； 立即取出，迅速冷却至室温。
2．样品测定
实验2 甲醛滴定法测定氨基氮含量
一、目的与要求
（1）掌握蛋白质氨基酸含量的甲醛 滴定法测定原理。
（2）熟悉滴定操作的要点。
二、原理
氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下电离平衡：
O R CH C
NH3+ O-
O
R CH C
+ H+
NH2 O-
-NH3+是弱酸，完全解离时pH为11～12或更高，若用 碱滴定所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小 于10，很难准确指示终点。
生物化学实验
武汉工业学院 生物与制药工程学院
任课教师：
刘军 闫达中 曾万勇 董国清 丁洪波
实验目录
实验1 淀粉的测定—1％盐酸旋光法 实验2 甲醛滴定法测定氨基氮含量 实验3 蛋白质含量测定—双缩脲法 实验4 油脂皂化与皂化值的测定 实验5 温度对酶活性的影响 实验6 血红蛋白的凝胶过滤 实验7 DNA的琼脂糖凝胶电泳 实验8 综合性实验 羧甲基纤维素酶活力及pH值
对酶活力影响 实验9 PCR方法检测转基因农产品大豆、玉米
实验 1 淀粉的测定—1％盐酸旋光法
一、目的与要求
掌握旋光法测粗淀粉的基本原理; 掌握旋光仪的使用方法。
二、原理
在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸 溶液中。 在一定的水解条件下，一种谷物淀粉具有一种特 定的比旋光度。 因此可用旋光法测定 Nhomakorabea淀粉的含量。
2、使用方法
(1)将仪器接于220V交流电源。开启电源开关，约5分 钟后钠光灯发光正常，就可开始工作。
(2)检查仪器零位是否准确，即在仪器未放试管或放 进充满蒸馏水的试管时，观察零度时视场亮度是 否一致。如不一致，说明有零位误差，应在测量 读数中减去或加上该偏差值。或放松度盘盖背面 四只螺钉，微微转动度盘盖校正之（只能校正 0.5°左右的误差，严重的应送制造厂检修）。