枸杞子中多糖含量的测定柳婷，胡浩斌(陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000)摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。
先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。
多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。
用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。
关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。
表面鲜红色或暗红色，顶端有小凸起状的花柱痕，基部有白色的果梗痕，果皮柔韧，皱缩，果肉肉质，柔润而有粘性，种子多数，类肾形，无臭，味甜，微酸，具有滋肾补肝、润肺明目等功能。
近年来，人们对枸杞子的药理作用进行了深人研究，发现枸杞子能增强机体免疫力[3]、抗肿瘤、抗辐射[4]、抗疲劳[5]、防衰老、增加造血功能等。
临床医学研究还表明，枸杞子对糖尿病[6]、高血压[7]、视神经萎缩、肾炎、肝炎[8]等有显著疗效。
对于枸杞子的上述功能的重要作用因子，一般认为与枸杞子中存在的枸杞多糖有关。
因此，开始研究枸杞多糖，测定枸杞多糖的含量就显的非常重要。
鉴于枸杞多糖的分离纯化[9]困难,有关结构性质方面的研究报道甚少,枸杞多糖的生理活性,还必需从分离纯化、结构特征及药理作用3方面展开深入研究。
这样,医学临床应用与保健型枸杞饮品[10]的开发才有坚实的理论基础。
本试验主要完成枸杞多糖的分离与提纯，并对其含量用分光光度计[11]进行初步测定，为今后更深人地研究枸杞多糖的化学结构和活性功能[12]等工作提供基础资料。
1 实验材料1.1实验药品葡萄糖标准液：精确称取105 ℃干燥恒重的标准葡萄糖100 mg，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度。
苯酚液：取苯酚100 g，加铝片0.1 g，碳酸氢钠0.05 g，蒸馏收集182℃馏分，称取此馏分10 g，加蒸馏水150 g，置棕色瓶中备用。
新鲜枸杞子，石油醚，80%乙醚，氯仿，活性炭，95%乙醇，浓硫酸，蒸馏水,80%乙醇，无水乙醇，丙醇1.2 实验仪器721紫外分光光度计，圆底烧瓶，烧杯，100 ml容量瓶，250 ml容量瓶，抽滤装置，真空干燥器，电子天平，减压浓缩装置，回流装置，蒸馏装置，电炉子，分液漏斗，温度计，棕色试剂瓶。
2 实验方法与结果2.1 枸杞多糖精制的大体流程枸杞多糖的提取[13]分离过程：枸杞子—剪碎—石油醚脱脂—乙醚浸泡—滤渣加蒸馏水—滤液—减压浓缩—氯仿—活性炭脱色—抽滤—滤液加入95%乙醇—静置过夜—过滤—沉淀物洗涤—真空干燥—得枸杞多糖2.2 枸杞多糖的提取与精致称取剪碎的枸杞子100 g，经石油醚（60-90 ℃）500 ml回流脱脂二次，每次2 h，回收石油醚。
再用80%乙醚500 ml浸泡过夜，回流提取二次，每次2 h，将滤渣加蒸馏水3000 ml，90 ℃热提取1 h，滤液减压浓缩至300 ml，用氯仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。
过滤，沉淀物用无水乙醇、丙醇、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得枸杞多糖。
2.3 标准曲线制备吸取葡萄糖标准液10、20、40、60、80、100 μl，分别置于带塞贴标签试管1、2、3、4、5、6中，各加蒸馏水使体积为2.0 ml，再加苯酚试液1.0 ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 ml，摇匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，取出冷却至室温；另以蒸馏水2 ml，加苯酚和浓硫酸，加入0号带塞试管，同上操作做空白对照。
于490 nm处测吸光度（表1浓度与吸光度关系表），绘制标准曲线（图1浓度与吸光度对应图）。
0 1 2 3 4 5 6浓度（c）0 1.25 2.50 5.00 7.50 10.00 12.50吸光度（A）0.1427 0.1718 0.2004 0.2090 0.2839 0.3342 0.4175表1 浓度与吸光度关系精确称取枸杞多糖20 mg,置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度（贮备液）吸取贮备液200 ml，测吸光度A为0.2182，从标准曲线中求出试液中葡萄糖的含量为3.75 μg/mL，按下式计算因素F=m/(p×D)。
式中:m为多糖质量（μg）；p为多糖液中葡萄糖的浓度；D为多糖的稀释因素；测得F=3.192.5 样品溶液的制备精确称取样品粉末0.2 g，置于圆底烧瓶中，加80%乙醇100 ml回流提取1 h，趁热过滤，残渣用80%乙醇洗涤（10 ml ×3）.残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水100 ml，加热提取1 h，趁热过滤，残渣用热水洗涤（10 ml×3），洗液并入滤液，放冷后移入250 ml容量瓶中，稀释至刻度，备用。
2.6 样品中多糖的测定吸取适量样品液，加蒸馏水至2 ml ，按标准曲线下的方法测吸光度A 为0.2343，查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69（μg/ml ）。
2.7 结果计算多糖含量%=100mF D p ⨯⨯⨯ 式中：p ：样液葡萄糖浓度（μg/ml ）；D ：样品液稀释因素；F ：换算因素；m ：样品质量（μg ）。
测量结果代入得：多糖含量%=12.51%3 实验讨论（1）苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H 2SO 4的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。
本法操作简单，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。
（2）枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。
（3）试验中发现，浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大，采取移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，显色反应充分，且显色结果稳定。
（4）各种单糖的标准曲线均只在0～30 μg 含量范围内呈较好的线形关系，因此制作标准曲线时，单糖浓度不宜太大。
（5）本法采用精制的枸杞多糖作为对照品，计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子，再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量，这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差，结果更准确。
(6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。
由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。
而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染，且取得了很好的经济效益。
本实验所测得枸杞含糖量高，实验材料为上好的宁夏枸杞。
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