分子生物学复习目录1、人类基因组计划（Human Genome Project, HGP）的精髓？2、如何应用人类基因组基础研究辅助临床医学？3、什么是基因表达？试述基因表达的特点及其调控对生物体的重要性？4、真核生物中，基因表达受不同水平的调控，请列举三种。
5、为什么说转录的调控是基因表达调控的中心环节？6、举例说明DNA 甲基化与肿瘤的关系7、如何动物建模来评价促创伤愈合的新药作用效果？8、对于新型促愈合药物可能的作用机制的研究思路？9、试述外源基因在原核体系中的表达需要具备的条件，及影响外源基因表达的因素。
10、蛋白质的分离纯化技术依据蛋白质的性质分为哪几大类，请例举其中一类，谈谈它的原理及应用。
11、以2GM—CSF 为例，写出获得该基因工程重组蛋白纯品的流程。
12、干细胞应具备哪些生物学特点？13、何为干细胞不对称分裂？14、什么是细胞分化？为什么说细胞分化是基因选择性表达的结果？15、何为细胞全能性？如何证明分化成熟细胞的全能性？16、什么是表观遗传学？它主要研究什么内容？17、什么是甲基化，在调控基因表达过程中起什么作用？18、什么是基因印记？它的主要特征是什么？19、请叙述肝细胞对胰高血糖素或肾上腺素的反应过程。
20、细胞膜在信号转导的过程中起到怎样的作用？21、简述CRISPR/Cas-9 的基本原理及优点（与传统的基于同源重组的胚胎干细胞基因敲除相比较）22 、为何在筛选靶基因敲除的胚胎干细胞时还需经历阴性筛选过程？简述更昔洛韦（Ganciclovir）在胚胎干细胞阴性筛选中的作用机制。
23、基本概念siRNA＆miRNA；Dicer protein ；RISC；PTGS24、请说明RNAi 的作用机制。
25、请分析解释SU Guo 的实验结果。
26、什么是细胞凋亡（Cell apoptosis）？27、细胞凋亡有哪两条主要的途径？28、BCL—2 家族的分类和结构特征？29、P53 基因在细胞DNA 损伤中的作用？30、转录组及蛋白组的概念分别是什么？其研究内容分别包括哪些方面？31、如何利用转录组学及蛋白组学的方法筛选相关基因？（写出主要的检测指标及其实验方法名称）32、线粒体遗传有哪些特点？33、研究动物毒素对治疗人类疾病和药物开发有哪些启示？可具体举两个例子进行阐述34、研究动物毒素的方法有哪些，所面临的问题有哪些？35、如何看待基因治疗的安全性及社会伦理问题36、疾病研究的相关基因功能研究的方法及策略37、结合你的专业，论述线粒体与医学的关系1、人类基因组计划（Human Genome Project, HGP）的精髓？人类基因组计划的精髓是人类基因组图谱，包括遗传图谱、物理图谱、序列图谱、转录图谱。
遗传图谱：又称连锁图谱，是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。
遗传图谱的建立为基因识别和完成基因定位创造了条件。
物理图谱：指有关构成基因组的全部基因的排列和间距的信息。
绘制物理图谱的目的是把有关基因的遗传信息及其在每条染色体上的相对位置线性而系统地排列出来。
序列图谱：指测定每条染色体的DNA 序列，通过DNA 序列可以直接推出基因结构、定位已知基因、研究基因起源。
转录图谱：指在识别基因组所包含的蛋白质编码序列的基础上绘制的结合有关基因序列、位置及表达模式等信息的图谱。
通过这张图可以了解某一基因在不同时间、不同组织、不同水平的表达；也可以了解一种组织中不同时间、不同基因中不同水平的表达，还可以了解某一特定时间、不同组织中的不同基因不同水平的表达。
2、如何应用人类基因组基础研究辅助临床医学？人类疾病相关的基因是人类基因组中结构和功能完整性至关重要的信息。
人类基因组基础研究主要通过基因诊断、基因治疗和基于基因组知识的治疗、基于基因组信息的疾病预防、疾病易感基因的识别、风险人群生活方式、环境因子的干预等方式辅助临床医学；具体的方式如下：1）基因工程药物：分泌蛋白（多肽激素，生长因子，趋化因子，凝血和抗凝血因子等）及其受体。
2）诊断和研究试剂产业：基因和抗体试剂盒、诊断和研究用生物芯片、疾病和筛药模型。
3）对细胞、胚胎、组织工程的推动：胚胎和成年期干细胞、克隆技术、器官再造。
4）制药工业：筛选药物的靶点：与组合化学和天然化合物分离技术结合，建立高通量的受体、酶结合试验以知识为基础的药物设计：基因蛋白产物的高级结构分析、预测、模拟—药物作用“口袋”。
个体化的药物治疗：药物基因组学。
5）基础生物学：基因功能的定位；6）交叉学科的兴起。
如：基因组学和生物信息学等。
3、什么是基因表达？试述基因表达的特点及其调控对生物体的重要性？1）基因表达︰从DNA 到蛋白质的过程（是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息，经过转录、翻译等一系列过程，合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质，表现出特定的生物学效应的全过程）但并非所有的基因表达都过程都产生蛋白质，rRNA tRNA 编码基因转录产生RNA 的过程也属于基因表达。
2）特点①组织特异性︰不同组织细胞中不仅表达的基因数量不同，而且基因表达的强度和种类也不相同。
②阶段特异性︰细胞分化发育的不同时期，基因表达的情况不相同。
③与环境相适应︰当周围的营养、温度、湿度、酸度及各条件变化时，生物体就要改变自身的基因表达状况，以调整体内执行和相应功能的蛋白质的种类、数量，从而改变自身的代谢活动度以来适应环境。
（3）对生物体的重要性︰1、适应环境、维持生长和繁殖。
2、维持个体发育和分化。
4、真核生物中，基因表达受不同水平的调控，请列举三种。
A.转录前调控︰基因丢失；（原生动物、线虫、昆虫和甲壳类动物）转录前调控，非洲蛙蟾的卵母细胞中原有的rRNA 基因约500bp，卵裂期和胚胎期需要大量的rRNA，基因会大量复制rRNA,使拷贝数达到200 万倍，扩增约4000 倍。
基因扩增（gene amplification）；基因重排（gene rearrangement）。
DNA 的甲基化（DNA methylation）组蛋白修饰（Histone modification）/及组蛋白的修饰。
B.转录水平的调控︰转录调控是通过各种调控元件相互作用来实现的，调控元件主要包括顺式作用元件和反式作用因子。
C.转录后调控︰hnRNA 的选择性加工运输；mRNA 前体的选择性剪接；RNA 编辑；RNAi。
5、为什么说转录的调控是基因表达调控的中心环节？答︰基因调控主要发生在转录阶段，尤其起始阶段，因为这些是表达的起始阶段，可以避免那些不需要的转录所造成的资源浪费。
转录调控是通过各种调控元件相互作用来实现的，调控元件主要包括顺式作用元件和反式作用因子。
而且转录起始是基因表达的基本调控点，涉及DNA 序列调控蛋白及这些因素对RNA 聚合酶活性的影响，顺式作用元件和反式作用因子之间相互作用，均在转录起始来表达，而转录后的加工修饰为RNA 以及翻译及翻译后的蛋白质修饰都是以转录水平为基础的。
6、举例说明DNA 甲基化与肿瘤的关系答︰DNA 甲基化是基因表达修饰方式之一，与基因表达调控密切相关，它能关闭一些基因的活性，而去甲基化能诱导基因的重新活化及表达。
DNA 甲基化修饰通过改变基因的表达，参与了细胞的生长、发育过程及X 染色体失活等的调控。
DNA 甲基化能引起染色质结构、DNA 构象、DNA 的稳定性、DNA 与蛋白质相互作用方面的改变，从而控制基因表达。
加计划的状态的改变是引起肿瘤的一个重要因素。
这种变化包括︰（1）整体甲基化水平降低；（2）正常非甲基化CpG 岛的高甲基化；（3）维持甲基化模式酶的调节失控。
从而导致基因组的不稳定（如︰染色体的不稳定，可移动遗传因子的激活，原癌基因的表达）和抑癌基因的不表达。
列如︰对家族性和散发型乳腺癌和结肠癌的研究中发现，家族性肿瘤中序列无突变的10 个抑癌基因启动子区域甲基化常见，但在突变的抑癌基因中没有发现甲基化的现象。
由此可见︰DNA 甲基化模式的改变和肿瘤的发生、发展密切相关。
7、如何动物建模来评价促创伤愈合的新药作用效果？8、对于新型促愈合药物可能的作用机制的研究思路？9、试述外源基因在原核体系中的表达需要具备的条件，及影响外源基因表达的因素。
外源基因表达所要具备的条件︰（1）编码区不含插入序列（mRNA-cDNA）;(2)位于启动子下游，方向一致，原有的读码框不变；（3）含起始密码子（AUG）,终止密码（TAA）;(4)转录的必须有SD 序列，调节SD 序列与第一个AUG 间的距离；（5）选择系统编号的简并密码；（6）增强产物的稳定（如︰融合蛋白，信号肽）。
影响因素︰（1）启动子的强弱（主要因素）；（2）基因的剂量；（3）RNA 转录效率（SD 互补，AUGSD 距离及序列，AUG 前后核苷酸序列的适宜性）；（4）密码子；（5）表达产物的大小；（6）产物的稳定性。
10、蛋白质的分离纯化技术依据蛋白质的性质分为哪几大类，请例举其中一类，谈谈它的原理及应用。
答︰蛋白质的分离纯化可分为︰①依据溶解度差别，如硫酸铵分离法；②依据分子大小不同︰透析、超过滤、离心法、凝胶过滤层析、凝胶电泳；③依据蛋白质分子带点性质不同︰电泳、离子交换层析；④依据蛋白质吸附性质不同︰吸附柱层析、吸附薄层层析；⑤利用蛋白质的特异性配体︰亲和层析。
举例︰电泳。
其原理︰在一定PH 值下，细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动，向正极或负极移动。
各种细胞或处于不同生理状态的同种蛋白质所带电荷的电量不同，故在一定的电场中的泳动速度也不同。
（影响颗粒电泳迁移率的因素︰缓冲液，电场，支持介质）类型︰SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电点聚焦电泳、毛细管电泳。
应用︰电泳的类型很多，应用范围也很广，如︰SDS-PAGE，常用于蛋白质分子量的测定︰目前，双向凝胶电泳已成为蛋白质组学研究的重要技术。
11、以2GM—CSF 为例，写出获得该基因工程重组蛋白纯品的流程。
答：1、GM—CSF 全基因及可溶性sGM—CSF 基因PCR 扩增。
2、含肠激酶位点的pth10HisA· sGM—CSF 表达载体的构建（纯化后的GM—CSF，sGM—CSF 及质检）。
3、诱导表达pth10HisA· sGM —CSF 在大肠杆菌BL21 中诱导表达。
4、sGM—CSF 融合蛋白的制备<1 度工程菌的培养2 度超声破坏菌体。
5、sGM—CSF 融合蛋白的纯化<1 度融合表达载体pthhisa 在硫氧还蛋白融合段有组氨酸标签，用M2+固相化的chelating sepharose fast flow 填材料进行亲和，层析2 度将可溶性表达产物（超声波，噬菌体的离心上清）与亲和柱结合，用2 信柱床体积以上的A 液过柱至基线平稳，用B 液（A 液加入朱唑至浓度为50mmol/L)梯度习脱5—10 个柱体体积，用AKATA Explore 进行检测，收集各洗脱液）。