马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究陈丽花1,李志军1,王定勇2(1.广州经济技术开发区红十字会医院药学部,广东广州510530;2.广东药学院药科学院,广东广州510006)摘要:目的研究马鞭草(Verbena officinalis L.)抗乙肝有效部位的化学成分㊂方法采用柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用IR㊁ESI⁃MS㊁1H⁃NMR㊁13C⁃NMR 等波谱技术鉴定结构㊂结果分离并鉴定了6个化合物,分别为山柰酚(1)㊁槲皮素(2)㊁杨梅素(3)㊁熊果酸(4)㊁马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)㊂结论首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3㊁6为首次从该植物中分离得到㊂关键词:马鞭草;杨梅素;抗乙肝作用中图分类号:R 284.1　文献标识码:A　文章编号:1006-8783(2009)03-0242-03Chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalisCHEN Li⁃Hua 1,LI Zhi⁃jun 1,WANG Ding⁃yong 2(1.Department of Pharmacy ,Red Cross Hospital ,Guangzhou Economic and Technological DevelopmentDistrict ,Guangzhou 510530,China ;2.College of Pharmacy ,Guangdong Pharmaceutical College ,Guangzhou ,Gunagdong 510006,China )Abstract :Objective To study the chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalis.Methods The constituents were separated and purified by column chromatography and thin layer chromatography,and their structures were elucidated by IR,MS,1H⁃NMR and13C⁃NMR.Results Sixcompounds were isolated from the effective fraction of Verbena officinalis :kaempferol (1),quercetin (2),myricetin (3),ursolic acid (4),verbenalin (5)and myricetrin (6).Conclusions Chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalis were first pounds 3and 6were obtained from this plant for the first time.Key words :Verbena officinalis ;chemical constituents;myricetin;anti⁃hepatitis B virus收稿日期:2009-03-02;修回日期:2009-05-19基金项目:广州市中医药中西医结合科研计划课题(2008A81)作者简介:陈丽花(1962-),女,广东广州人,主管药师;通讯作者:王定勇(1967-),男,博士,教授,硕士生导师,主要从事天然药物化学研究,Tel:020⁃39352140,Email:wdingyong@㊂ 马鞭草(Verbena officinalis L.)为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物,始载于‘名医别录“,民间以其全草或带根全草入药㊂马鞭草作为传统中药,具有清热解毒㊁消肿利尿㊁活血通经等功效,广泛用于治疗伤风感冒㊁水肿㊁痢疾㊁黄疸等证[1]㊂现代研究表明,马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg,并能抗乙肝纤维化[2-3]㊂利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术[4],作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位㊂为阐明其药效物质基础,本文对该有效部位进行系统的化学成分研究,从中分离得到6个化合物,分别鉴定为山柰酚(1)㊁槲皮素(2)㊁杨梅素(3)㊁熊果酸(4)㊁马鞭草苷(5)和杨梅苷(6),其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到㊂1　仪器与材料熔点用XRC⁃1显微熔点仪(四川大学科仪厂制242广东药学院学报　Journal of Guangdong Pharmaceutical College Jun.2009,25(3)造)测定,温度计未校正;红外光谱用Nicolet PROTÉGÉ460光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用Bruker AM⁃500型核磁共振仪测定,TMS为内标; ESI⁃MS在HP⁃1100LC/MS上测定㊂柱色谱用硅胶(200~300目)㊁薄层色谱用硅胶(10~40μm)均为青岛海洋化工厂生产,Sephadex LH⁃20为美国GE 公司产品,ODS为日本YMC产品㊂马鞭草于2008年8月采自广东省广州市,由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(Verbena officinalis L.)㊂2　提取与分离取阴干的马鞭草10kg,粉碎至约60目,用适量甲醇室温浸泡3次,每次7d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280g㊂取该提取物250g分散于适量热水中再转移至2500mL分液漏斗,依次用石油醚㊁CHCl3萃取3次(每次用1 000mL溶剂),除掉极性小的化学成分,再用EtOAc 萃取3次(每次用1000mL),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35g㊂ELISA法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]㊂有效部位经硅胶柱层析(200~300目),三氯甲烷⁃甲醇系统(体积比20∶1~0∶1)梯度洗脱㊂TLC检测,合并相同组分,共得到7个部分;各部分再经Sephadex LH⁃20柱层析[洗脱剂为甲醇⁃水(体积比3∶2)]㊁ODS柱层析[洗脱剂为乙腈⁃水(体积比1∶1)]㊁制备薄层层析(展开剂为氯仿⁃甲醇体系)等反复分离纯化,得到化合物1(20mg)㊁2(38mg)㊁3 (15mg)㊁4(30mg)㊁5(55mg)和6(10mg)㊂3　结构鉴定化合物1:黄色粉末,mp275.0~276.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):287.0[M+ H]+㊂1H⁃NMR(500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.18(1H, s,5⁃OH),8.15(2H,d,J=8.5Hz,H⁃2′,6′),7.02 (2H,d,J=8.5Hz,H⁃3′,5′),6.55(1H,d,J=2.0 Hz,H⁃8),6.27(1H,J=2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR (125MHz,DMSO⁃d6)δ:146.9(C⁃2),133.5(C⁃3),176.5(C⁃4),162.2(C⁃5),99.0(C⁃6),164.9 (C⁃7),94.3(C⁃8),157.6(C⁃9),103.9(C⁃10), 123.1(C⁃1’),130.3(C⁃2′,6′),116.2(C⁃3′,5′), 160.1(C⁃4′)㊂以上波谱数据与文献[5]报道的山柰酚一致㊂化合物2:黄色粉末,mp303.0~304.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):325.0[M+Na]+㊂1H⁃NMR(500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.20 (1H,s,5⁃OH),7.80(1H,d,J=1.8Hz,H⁃2′),7.68 (1H,dd,J=8.6,1.8Hz,H⁃6′),6.98(1H,d,J=8.6 Hz,H⁃5′),6.51(1H,J=2.0Hz,H⁃8),6.26(1H,J =2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ: 146.8(C⁃2),136.5(C⁃3),176.6(C⁃4),157.5(C⁃5),99.1(C⁃6),164.8(C⁃7),94.3(C⁃8),162.6 (C⁃9),104.0(C⁃10),123.6(C⁃1′),115.6(C⁃2′), 145.7(C⁃3′),148.1(C⁃4′),116.0(C⁃5′),121.3 (C⁃6′)㊂以上波谱数据与文献[5]报道的槲皮素一致㊂化合物3:棕黄色针晶(MeOH),mp324.0~ 325.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z): 319.3[M+H]+㊂IR(KBr)νmax/cm-1:3350, 3028,1660,1609,1544,1447,1316,1245,1200, 1163,1113,1095,1026,939㊂1H⁃NMR(500MHz, DMSO⁃d6)δ:12.50(1H,s,5⁃OH),7.25(2H,s,H⁃2′,6′),6.37(1H,d,J=2.0Hz,H⁃6),6.17(1H,J= 2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ: 147.3(C⁃2),136.5(C⁃3),176.2(C⁃4),161.2(C⁃5),98.6(C⁃6),164.8(C⁃7),93.8(C⁃8),156.6 (C⁃9),103.4(C⁃10),121.2(C⁃1′),107.7(C⁃2′, 6′),146.2(C⁃3′,5′),136.5(C⁃4′)㊂以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅素一致㊂化合物4:白色针状晶体(EtOAc),mp285.6~ 287.0℃,硫酸⁃香兰醛显紫色㊂ESI⁃MS(m/z): 455.2[M⁃H]-㊂1H⁃NMR(500MHz,CDCl3)δ: 5.13(1H,t,J=3.6Hz,12⁃H),3.75(1H,dd,J= 10.4,4.6Hz,3⁃H),0.68(3H,s),0.75(3H,s, Me),0.87(3H,s,Me),0.89(3H,s,Me),1.05 (3H,s,Me),0.80(3H,d,J=6.5Hz,Me),0.92 (3H,d,J=6.3Hz,Me)㊂13C⁃NMR(125MHz, CHCl3)δ:38.3(C⁃1),26.9(C⁃2),76.8(C⁃3),38.7(C⁃4),54.8(C⁃5),18.0(C⁃6),32.7(C⁃7),39.0(C⁃8),40.1(C⁃9),36.5(C⁃10),22.8(C⁃11),124.5(C⁃12),138.1(C⁃13),41.6(C⁃14), 27.5(C⁃15),23.8(C⁃16),46.8(C⁃17),52.3(C⁃18),38.5(C⁃19),38.4(C⁃20),30.2(C⁃21),36.3 (C⁃22),28.2(C⁃23),15.2(C⁃24),16.0(C⁃25), 16.8(C⁃26),23.2(C⁃27),178.1(C⁃28),16.9(C⁃29),21.0(C⁃30)㊂以上波谱数据与文献[7]报道的熊果酸一致㊂化合物5:无色针状晶体(MeOH),mp181.5~ 183.0℃㊂ESI⁃MS(m/z):389.1[M+H]+㊂1H⁃NMR342　第3期　陈丽花,等.马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究(500MHz,CD3OD)δ:1.22(3H,d,J=6.7Hz,H⁃10),2.01(1H,dd,J=4.0,18.3Hz,H⁃7α),2.21 (1H,m,H⁃9),2.48(1H,m,H⁃8),2.54(1H,dd,J= 8.0,18.3Hz,H⁃7β),3.62(1H,dd,J=5.6,12.0 Hz,H⁃5),5.22(1H,d,J=7.2Hz,H⁃1),7,45(1H, s,H⁃3),3.58(3H,s,11⁃OCH3),4.64(1H,d,J=7. 8Hz,H⁃1′),3.23(1H,dd,J=9.0,7.8Hz,H⁃2′), 3.36(1H,t,H⁃3′),3.28(1H,m,H⁃4′),3.27(1H, m,H⁃5′),3.84(1H,dd,J=11.4,0.6Hz,H⁃6′a), 3.63(1H,dd,J=11.4,5.4Hz,H⁃6′b)㊂13C⁃NMR (125MHz,CD3OD)δ:97.5(C⁃1),153.8(C⁃3), 105.4(C⁃4),43.5(C⁃5),215.8(C⁃6),43.7(C⁃7),29.8(C⁃8),45.5(C⁃9),20.6(C⁃10),169.1 (C⁃11),51.9(11⁃OCH3),100.5(C⁃1′),74.8(C⁃2′),77.9(C⁃3′),71.5(C⁃4′),78.5(C⁃5′),62.7 (C⁃6′)㊂以上波谱数据与文献[8]报道的马鞭草苷一致㊂化合物6:黄白色片状结晶(MeOH),mp182.5 ~184.0℃㊂HCl⁃Mg试验和Molish试验均显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):465.3[M+H]+㊂IR(KBr)νmax/ cm-1:3401,2928,1655,1606,1458,1345, 1290,1201,1165,1075,1040,969,917㊂1H⁃NMR (500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.68(1H,s,5⁃OH),6.88 (2H,s,H⁃2′,6′),6.36(1H,d,J=2.1Hz,H⁃6), 6.20(1H,J=2.1Hz,H⁃6),5.21(1H,brs,H⁃1″), 3.76(1H,brs,H⁃2″),3.56(1H,dd,J=9.4,2.9Hz,H⁃3″),3.16(1H,t,J=9.5Hz,H⁃4″),3.98(1H, brs,H⁃5″),0.85(3H,d,J=6.1Hz,H⁃6″)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ:156.8(C⁃2),134.5 (C⁃3),178.2(C⁃4),161.9(C⁃5),99.1(C⁃6), 164.7(C⁃7),94.0(C⁃8),158.0(C⁃9),104.4(C⁃10),121.1(C⁃1′),108.2(C⁃2′,6′),146.2(C⁃3′, 5′),136.8(C⁃4′),102.5(C⁃1″),70.8(C⁃2″),71. 1(C⁃3″),71.7(C⁃4″),70.5(C⁃5″),18.0(C⁃6″)㊂以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅苷一致㊂参考文献:[1]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,2000:303-305.[2]钟有添.中医药治疗乙型肝炎研究进展[J].赣南医学院学报,2004,24(2):224-226.[3]李彦卿.马鞭草治疗病毒性乙型肝炎[J].中医杂志, 2001,42(7):392.[4]郑民实,张玉珍,陈永康,等.ELISA技术检测中草药抗HBsAg[J].中西医结合杂志,1990,10(9):560-562.[5]陈改敏,张建业,张向沛,等.马鞭草黄酮类化学成分的研究[J].中药材,2006,29(7):677-679.[6]廖华卫,刘恩桂,王定勇.杨梅树皮的化学成分研究[J].中南药学,2006,4(3):196-199.[7]伍俊妍,李国成,王定勇.大叶钩藤非生物碱部分的化学成分研究[J].南方医科大学学报,2007,27(2):226-227.[8]DIRK T,PETER J.Iridoid glucosides from Penstemonnitidus[J].Plant Med,1991,57:184-185.欧洲药品管理局建议取消对Neupro透皮贴剂的供应和治疗限制欧洲药品管理局于近日建议取消对许瓦兹制药公司的Neupro(罗替戈汀透皮贴剂)的供应和治疗限制㊂一旦该项建议得到欧洲委员会的批准,禁止为未使用该药的患者开具Neupro的禁令将被终止㊂欧盟国家的医生将能根据结批准的产品信息为患者开具处方,处方时间也将不再限定为1个月㊂Neupro透皮贴剂现用于帕金森氏病和不安腿综合征的治疗㊂在有报道指出,Neupro透皮贴剂中的活性物质在贮存过程中出现结晶现象后,EMEA属下的人用医疗产品委员会(CHMP)在2008年5月举行的会议上,建议立即改变该产品的保存条件㊂建议该药贮存于温度为2~8℃的冰箱内㊂同时建议Neupro透皮贴剂只能处方给已服用过罗替戈汀的患者,每次处方不能超出1个月㊂在许瓦兹公司根据新的贮存条件,实行冷链贮存和配送㊂在对许瓦兹公司的冷链系统进行考察后,CHMP确认在新的贮存条件下,Neupro无明显结晶生成,可以处方给患者使用㊂(来源:EMEA) 442广东药学院学报　第25卷　。