于25mL 量瓶中,加水溶解,定容。
精密称取醋酸地塞米松4.16mg 、雌三醇3.89mg,置于同一25mL 量瓶中,用甲醇溶解,定容。
分别精密吸取上述2种溶液各0.1,0.25,1,2,3,4,5mL ,置于同一10mL 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,配制成系列浓度溶液,在上述色谱条件下进样测定。
以峰面积为纵坐标(Y ),浓度为横坐标(X )进行线性回归,得盐酸环丙沙星的回归方程为Y =9.8924X -16.0486,r =0.9999;醋酸地塞米松的回归方程为Y =36.8673X +5.4933,r =0.9999;雌三醇的回归方程为Y =6.9251X +1.9379,r =0.9999。
结果表明:盐酸环丙沙星在15.97~798.4mg L -1、醋酸地塞米松在1.66~83.2mg L -1、雌三醇在1.56~77.8mg L -1范围内峰面积与浓度均呈良好线性关系。
2.5 精密度试验 取同一浓度对照品溶液,在上述色谱条件下连续测定6次。
盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇的RSD 分别为0.34%,0.76%,0.38%,表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 取同一浓度对照品溶液,分别在0,2,4,6,8h 进样测定。
盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇的RSD 分别为1.08%,0.98%,0.74%。
表明供试品溶液至少在8h 内稳定。
2.7 重复性试验 取供试品溶液6份,照 2.1!项下的色谱条件进样,记录色谱图并计算含量。
结果盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇的平均RSD 分别为0.68%,0.63%,0.41%。
表明该方法测定复方雌三醇阴道生物黏附膜中3组分重复性良好。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的药膜适量,分别精密加入盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松和雌三醇对照品,按样品测定方法处理,依法测定3种主要成分的含量,计算回收率,结果见表1。
表1 加样回收率试验结果(n =3)T ab 1 Results of the r eco very deter minatio n(n =3)药品名称样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/%平均回收率/%RSD /%盐酸环丙沙星28.4214.9643.1599.4740.4720.2960.3199.2699.670.5450.0125.1975.41100.28醋酸地塞米松3.111.584.6398.734.122.076.0798.0798.540.425.052.557.5198.82雌三醇3.121.624.6297.534.202.076.1798.5598.440.875.172.597.7099.232.9 样品测定 取面积为2cm ∀2cm 的药膜一张,按 2.2!项下方法制备成每1mL 含盐酸环丙沙星0.5mg 、醋酸地塞米松0.05mg 、雌三醇0.05mg 的溶液,在上述色谱条件下进样,记录色谱图;另取盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇对照品,照 2.2!项下方法制成混合溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算供试品中3种主药的含量。
取不同批号样品3批,照样品溶液处理方法处理,按 2.1!项下色谱条件重复进样3次,结果见表2。
[作者简介]刘忠,男,学士,副主任药师,电话:027 ********,E m ail:liuzhong _pu ai @表2 样品测定结果(n =3)T ab 2 Content determ inat ion results of sample(n =3)批号相当于标示量的百分含量/%盐酸环丙沙星醋酸地塞米松雌三醇20070412100.0101.299.220070414101.2100.197.22007041899.399.796.93 讨论本试验过程中曾试用过多种不同的流动相,如0.05mol L -1枸橼酸溶液 乙腈、磷酸缓冲液 无水乙醇(2#1)、甲醇 水均未达到同时分离三者的目的。
后尝试用0.05mol L -1枸橼酸(三乙胺调pH 至3.51) 甲醇(40#60)为流动相,采用两种波长(242nm 处测定醋酸地塞米松和盐酸环丙沙星,277nm 处测定雌三醇)可同时将盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松和雌三醇分离测定。
结果表明:采用两种波长同时测定药膜中3种组分,分离效果佳,峰形对称,重复性好,且方法简便,可作为复方雌三醇阴道生物黏附膜的含量测定方法。
参考文献:[1] J ustin Temu M ,Damian F,Kinget R,et al .In travaginal gelsas drug delivery sys tem [J ].J Womens health (Larch mt),2004,13(7):834 844.[2] 贾守雄,魏琴,李平,等.正交试验优选壳聚糖阴道生物黏附膜处方[J].中国新药杂志,2008,17(6):1422 1439.[收稿日期]2008 09 11高效液相色谱法测定布洛芬注射液的含量及有关物质刘忠,宋红萍,徐隽,平成斌,陈冠容 (武汉市普爱医院,湖北武汉430033)[摘要] 目的:建立高效液相色谱法测定布洛芬注射液的含量及有关物质。
方法:采用H y per sil O DS C 18(4.6mm ∀250mm,5 m)色谱柱,以0.01mol L -1磷酸二氢钾溶液(pH 3.0) 乙腈(45#55)为流动相,紫外检测波长为263nm,流速为1.0mL min -1,柱温为室温。
结果:本方法能分离注射液中布洛芬及其有关物质,布洛芬在200~800mg L -1范围内呈良好的线性关系(r =1.000,n =7)。
平均回收率为100.2%(RSD =0.8%,n =9)。
结论:本方法专属性好、准确、稳定可靠,可用于布洛芬注射液的含量测定及有关物质检查。
[关键词] 布洛芬;注射液;高效液相色谱法;有关物质[中图分类号]R 927.2 [文献标识码]A [文章编号]1001 5213(2009)10 0856 03布洛芬是一种疗效确切,不良反应少、安全性高的常用解热镇痛药。
临床上主要用于感冒,退热止痛和抗风湿等。
目前国内上市的剂型有片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、口服缓释胶囊和外用软膏剂,无注射液。
由于布洛芬不溶于水,口服应用胃肠道溶出慢,并有刺激性。
为解决布洛芬不溶于水的难题和扩大临床适应证,如快速退热镇痛以及用于动脉导管未闭等,采用精氨酸以增加布洛芬在水中的溶解度,制备成供静脉或肌注的注射剂。
现将布洛芬注射液的含量测定和有关物质检查报道如下。
1 材料岛津L C -20A T 泵,岛津SP D -20A 紫外检测器,7725i 进样阀,岛津L Csolution 色谱工作站;布洛芬对照品(湖北百科亨迪药业有限公司,含量:99.9%);布洛芬原料(湖北百科亨迪药业有限公司,批号200406107M );精氨酸原料(无锡晶海氨基酸有限公司,批号041005);布洛芬注射液(武汉市普爱医院,批号20061010,20061012,20061015,20061018,20061020,20061021);乙腈为色谱纯,磷酸二氢钾为分析纯。
2 处方和制备2.1 处方 布洛芬100g,精氨酸82g,注射用水加至1000mL 。
2.2 制备方法 取精氨酸,加注射用水800mL,搅拌使溶解完全,加布洛芬,搅拌使溶解完全,加注射用水至足量,搅拌混合均匀,经0.2 m 微孔滤膜滤过,分装于2mL 无色安瓿中,熔封,100∃流通蒸汽灭菌,即得。
3 方法与结果3.1 色谱条件 色谱柱:H y per sil ODS C 18(4.6mm ∀250mm,5 m );流动相:0.01mo l L -1磷酸二氢钾溶液(pH 3.0) 乙腈(45#55);紫外检测波长:263nm;流速:1.0mL min -1;进样量:20 L ;柱温:室温。
3.2 分离度试验 取布洛芬注射液置于沸水浴100h,作为高温破坏样品;取布洛芬注射液置于50000Lx 强光下照射72h,作为光破坏样品;取布洛芬注射液,加3%过氧化氢溶液,作为氧化破坏样品;不经破坏的布洛芬注射液,作为正常处理样品;不含布洛芬的注射液,作为空白溶媒。
各样品分别加流动相稀释至布洛芬的质量浓度为1000mg L -1,进样20 L,按上述色谱条件测定,降解产物与主峰达到基线分离。
见色谱图1。
按布洛芬理论塔板数不小于2000。
3.3 线性范围 取布洛芬对照品250mg ,精密称定,置100mL 量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液,另精密量取对照品储备液2,3,4,5,6,7,8mL,分别置于25mL 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为系列标准溶液。
分别进样20 L ,结果布洛芬在200~800mg L -1范围内,峰面积(A )与质量浓度(C )之间呈良好的线性关系,回归方程:A =1596C -1056,r =1.000(n =7)。
3.4 精密度试验 取500mg L -1的布洛芬标准溶液,连续重复进样5次,结果其平均峰面积为796713,RSD 为0.1%(n =5)。
3.5 稳定性试验 取500mg L -1的布洛芬标准溶液,室温放置,重复进样6次,每次相隔2h,结果其平均峰面积为786552,RSD 为0.1%(n =6),表明溶液12h 内稳定性良好。
3.6 重复性试验 取同一批布洛芬注射液,精密量取分别相当于含量测定量取量的80%,100%,120%,各3份,依含量测定法,测定其含量,结果见表1。
3.7 回收率试验 取布洛芬对照品80,100,120mg (约相当于布洛芬注射液处方标示量的80%,100%,120%)各3份,精密称定,加入处方比例量的空白溶媒,搅匀,作为模拟样品,依含量测定法,测定其含量并计算回收率,结果见表2。
图1 不同条件破坏样品的色谱图A.高温破坏样品;B.氧化破坏样品;C.光破坏样品;D.正常处理样品;E.空白溶媒;1 布洛芬;2 有关物质Fig 1 S ample of Ib uprofen In jection des troy ed b y differen t condi tionsA.sam ple of ibuprofen injection destroyed by h igh temperature;B.S am ple of ib uprofen in jection des tr oyed by 3%H 2O 2;C.sam ple of ib uprofen injection des tr oyed by 50000Lx light;D.sample of ibupro fen injection;E.sample of blank solvent;1 ibup rofen;2 related sub stances表1 重复性试验结果T ab 1 Results of r epeatability test试验号取样量/m L 含量/%平均含量/%RSD/%14.0098.824.0099.934.0099.445.0098.455.00100.299.20.665.0099.776.0098.586.0099.596.0098.8表2 回收率试验结果T ab 2 Results of r eco ver y test试验号加入量/mg 测得量/mg 回收率/%平均回收率/%RSD/%181.981.299.1280.580.7100.2380.480.299.84101.3100.699.3598.399.7101.0100.20.8699.298.799.57117.7118.9101.08117.6118.3100.69116.0117.4101.23.8 含量测定 精密量取布洛芬注射液5mL ,置50mL 量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,作为稀释溶液,精密量取稀释溶液5mL ,置于100mL 量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,作为供试品溶液,取20 L 注入色谱仪中。