100. 6% , RSD = 2. 19% ( n = 6) 。
3. 1. 3 样品乌头类生物碱总量的测定 :各组织中乌头类总生物碱的含量见表 1,乌头各部分乌头类总生物
碱的含量差异明显 ,叶片中的含量最高为 : 14. 77 mg / g;茎秆中含量最低为 : 3. 81 mg / g;子根和母根中乌头类
附子是我国常用的中药和四川道地药材 ,其性大热 ,味辛 、甘 ,有毒 ,入心 、脾 、肾 ,通行十二经 ,具有回阳 救逆 、温里助阳 、祛寒止痛的功效 [1 ] ,近年来现代药理学研究证明 ,附子提取液还具有抗癌 、抗衰老和增强免 疫机能等作用 [2 ] 。根据人们对附子中次生代谢产物研究表明其主要有附子脂酸 、附子磷脂酸钙 、β - 谷甾 醇 、脂肪酸酯 、生物碱等成分 ,主要活性成分为生物碱 ,其中大多是二萜型生物碱 ,包括 C18 , C19和 C20三大 类 。其中 C19类型属去甲基二萜生物碱 ,大部分含有 1～2个酯化的醇羟基 ,酯基多由醋酸 、苯甲酸及其衍生
பைடு நூலகம்
第 1期 侯大斌 ,等 :附子不同组织中生物碱含量的测定
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物或黎芦酸等构成 ,双酯型生物碱毒性很大 ,为附子中主要的毒性和活性成分 [ 3 - 5 ] 。附子中双酯型生物碱最 具代表性的为 :乌头碱 ( aconitine) 、新乌头碱 (mesaconitine ) 与次乌头碱 ( hypaconitine) [ 6 ]等 。附子在我国 主要产地为四川江油和陕西汉中 ,其中四川江油为附子的道地产地 [7 ] 。根据人们长期的用药习惯 ,子根和 母根是药材的主要收获组织 ,而茎秆 、叶片和须根通常都被遗弃 。本文主要研究附子不同组织中乌头类总生 物碱与新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱 3种双酯型生物碱的含量 ,为附子栽培和资源综合利用提供科学依据 。
美国 Zorbax extend - C18 (150 mm ×4. 6 mm , 5. 0 μm )色谱柱 ;流动相为乙腈 —0. 1%乙二胺 ;梯度洗脱 , 时间程序为 0 →15 →30 →35 →60 m in, 乙腈体积分数相应为 35% →50% →75% →35% →35% ; 流速为 1 mL /m in;柱温为 30 ℃;检测波长 240 nm。
D eterm ina tion of A lka lo ids in D ifferen t T issue of A con itum ca rm ichae li
HOU Da2bin, ZHAO Xiang2sheng, WANG Hui, XU Yuan
( S chool of L ife S cience and Eng ineering, S ou thw est U n iversity of S cience and Technology, M ianyang 621010, S ichuan, Ch ina)
乙腈 ,乙二胺为色谱纯 ,水为超纯水 ,其余试剂均为分析纯 ;乌头碱 (NO. 110797 - 200404) , 新乌头碱 (NO. 110799 - 200404) ,次乌头碱 (NO. 110798 - 200404)对照品购于中国药品生物制品检定所 。
2 方法
2. 1 乌头类总生物碱含量测定 2. 1. 1 供试溶液的制备 取不同组织的附子粉各 0. 10 g (重复 5次 ) ,精密称定 ,置三角瓶中 ,精密加入 pH 值 3. 0 ±0. 1的 HAC - NaAC 缓冲液 20 mL ,浸泡过夜 ,用干燥滤纸滤过 ,用 HAC - NaAC缓冲液定容到 20 mL ,为供试溶液 。 2. 1. 2 标准曲线建立 乌头类总生物碱测定采用酸性染料比色法 [ 8, 9 ] ,以乌头碱的浓度 (μg /mL )为纵坐 标 ,以吸光度 X 为横坐标 ,绘制标准曲线 。 2. 2 新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱含量测定 2. 2. 1 供试溶液的制备 取不同组织的附子粉 0. 5 g共 3份 ,加浓氨试液 2 mL润湿 ,加乙醚 20 mL ,超声处 理 50 m in,过滤 ,并用乙醚洗涤 3次 ,每次 10 mL ,收集 、合并所有滤液 ,浓缩 ,挥干溶剂 。加入甲醇溶解残渣 , 定容到 10 mL 的容量瓶 ,取适量用 0. 45μm 微孔滤膜滤过 ,作为供试品溶液 [ 10 ] (避光 ,储存在冰箱中 ) 。 2. 2. 2 对照品溶液的制备 :分别精密称取新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱对照品适量 ,分别置 10 mL 的容量瓶 中 ,用甲醇溶解并定容 ,摇匀 ,得各单一成分对照溶液 ,作为储备液 ,其他不同浓度的对照品溶液由储备液稀 释得到 。 2. 2. 3 色谱条件
3 结果与分析
3. 1 乌头类总生物碱的测定 3. 1. 1 标准曲线建立 以乌头碱的浓度 (μg /mL )为纵坐标 ,以吸光度 X为横坐标 ,绘制标准曲线 ,求得回归 方程 : y = 22. 733x - 0. 142, r = 0. 9997, 乌头碱含量在 2～150μg /mL 范围内 ,其吸收度与乌头碱浓度呈良好
附子不同组织中生物碱含量的测定
侯大斌 赵祥升 王 惠 许 源
(西南科技大学生命科学与工程学院 四川绵阳 621010)
摘要 :对附子不同组织中乌头总碱和 3种双酯型生物碱 —新乌头碱 、乌头碱和次乌头碱的含量进行了测定 。用酸性 染料比色法测定乌头类总生物碱的含量 ;反相高效液相色谱法测定新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱的含量 ,色谱柱为 : Zorbax extend - C18 (150 mm ×4. 6 mm , 5. 0μm ) ,流动相为乙腈 —0. 1%乙二胺 ,梯度洗脱 ,流速为 l mL /m in,检测波 长为 240 nm ,柱温 30 ℃。结果表明 :附子不同组织中生物碱的含量呈现明显的差异性 。子根 、茎秆 、叶 、须根和母 根中乌头类总生物碱含量分别为 : 5. 53, 3. 81, 14. 77, 8. 87和 4. 58 mg/ g; 3种双酯型生物碱含量在不同组织中的含 量顺序为 :须根 >子根 >母根 >叶片 >茎秆 。该研究可为附子资源的综合利用提供科学依据 。 关键词 :附子 新乌头碱 次乌头碱 乌头碱 高效液相色谱法 中图分类号 : R282; S567 文献标识码 : A 文章编号 : 1671 - 8755 (2009) 01 - 0098 - 04
Abstract: To determ ine the total alkaloids and three kinds of diester diterpenoid alkaloids in different tis2 sue of A con itum ca rm ichaeli and its nam ely m esaconitine, aconitine and hypaconitine, acid dye colo rim e2 try and RP2HPLC was used. The compounds was analyzed on Zorbax extend 2C18 colum n (150 mm ×4. 6 mm , 5. 0μm ) and by gradient elution p rogram performed w ith acetonitrile and 0. 1% ethylenediam ine as a mobile phase. The flow rate was 1. 0m l/m in. The detection was done at 240 nm and column temperature was 30 ℃. The alkaloids contents of monkshood2tubers, stem , leaves, fibrous tubers and mother tubers were 5. 53, 3. 81, 14. 77, 8. 87 and 4. 58 mg / g respectively. The contents of three kinds of diester diterpe2 noid alkaloids in different tissue of A con itum ca rm ichaeli were in the sequence of: fibrous tubers > monkshood2tubers > mother tubers > leaves > stem. A ll tissues of A con itum ca rm ichaeli contained alka2 lo ids. This study can p rovide a scientific basis fo r the resources utilization of A con itum ca rm ichaeli. Key words: Hypacon itine; A con itum ca rm ichaeli; M esacon itine; HPLC
总生物碱含量处于中等水平 ,含量分别为 : 5. 53 mg / g, 4. 58 mg / g;叶片中乌头类总生物碱显著高于其他组
织 ,含量是子根和母根的近三倍 ,比须根的含量高出 66. 5%。各组织中乌头类总生物碱含量顺序为 :叶片 >
须根 >子根 >母根 >茎秆 。
3. 2 新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱的含量
表 1 附子不同组织中乌头类总生物碱的含量 ( n = 5) 3. 2. 1 色谱分析 对照品溶液与样品溶液的色谱图
Table 1 The con ten t of tota l a lka lo ids in d ifferen t
收稿日期 : 2008 - 11 - 17 基金项目 :国家“十一五 ”科技支撑计划重大专项课题 (NO. 2007BAD89B15) 。 作者简介 :侯大斌 (1965 - ) ,男 ,博士 ,教授 ,主要从事植物分子生物学及药用植物学研究 。 E - mail: dbhou@126. com。