实验九、尿液标本的细菌学检验
【器材】
发模拟尿标本1-4# 1套/桌，发高压灭菌营养琼脂1瓶/桌，发一个无菌平皿/人，无菌吸管。

【倾注平板法】（每人做）
1）稀释：
①取尿标本1# 0.2ml+NS1.8ml配成1:10尿标本
②从上述所配1:10尿标本中取0.2ml，加入1.8mlNS配成1:100尿标本
③从上述所配1:100尿标本中取0.2ml，加入1.8mlNS配成1:1000尿标本
2）涂无菌平板：分别从1:100和1:1000尿标本中取1ml加入各自无菌平皿中，并分别加50℃营养琼脂（10ml±），混均，冷凝后置35℃18—24h，菌落计数。

【直接涂片革兰染色镜检】（每人做）（1#尿标本）
【观察菌落特点】
在1:1000尿标本中菌落数大于100；1:1000尿标本中菌落数大于1000。

1~2mm圆形凸起、表面光滑湿润、呈金黄色、白色、柠檬色脂溶性不透明的菌落。

【各菌鉴定步骤】
革兰染色镜检：
1）G+C→触酶：
①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C 2）G-b→氧化酶
①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b
②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定
【实验结果】（1#尿标本）
1
1:100 G+葡萄状球菌
2）触酶试验（+）
3）血浆凝固酶试验（-）
鉴定结果：1#尿标本直接涂片革兰染色观察，平均每个视野≥1个细菌（表示细菌定量培养≥105/ml）；再经过细菌培养、菌落计数、触酶（+）、血浆凝固酶（-）鉴定1#尿标本中的细菌为表皮葡萄球菌。

【实验讨论】
1.标本采集及注意事项
1）标本采集：
①清洁中段尿
②导尿或膀胱穿刺留尿标本
2）注意事项：
①尿标本采集后应立即送检，以免污染
②要在未用抗生素前采集标本
③尿液中不得加防腐剂和消毒剂
2.菌落计数的影响因数较多，与抗生素的使用、输液、使用利尿剂、尿液的pH变化和细菌种类等有关。

3.尿液是良好的细菌生长环境，采取后应立即检验，放置时间过长会导致感染菌和杂菌过度生长，影响诊断的准确性。

不能及时接种的标本可临时存放4℃冰箱，但不得超过2h。

4.尿路感染病原体检验的临床意义
①尿路感染常见肾盂肾炎（急性和慢性）、膀胱炎（急性为主）、尿道炎（细菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎）、前列腺炎（慢性常见）等。

②尿路感染主要经尿道口上行感染所致，极少数为血行感染，即从体内感染灶侵入血流到达肾脏引起肾盂肾炎。

尿液细菌学检验可反映肾脏、膀胱、尿道、前列腺等处的炎症变化。

临床表现主要有尿频、尿急、尿痛、排尿困难和腰痛等。

③尿路感染需要明确部位和急性与慢性，主要依病原菌检测，还要紧密结合临床综合考虑做出诊断，药物敏感试验对指导临床合理使用有效抗生素有重要意义。

5.通过此次实验掌握尿液标本细菌学检验程序、方法和注意事项以及掌握尿液标本的细菌计数方法。