Ago----argonaute蛋白
谢 谢！
概述 原理 方法 比较 举例
Saleh A, Alvarez-Venegas R, Avramova Z. An efficient chromatin immunoprecipitation (ChIP) protocol for studying histone modifications in Arabidopsis plants. Nat Protoc. 2008;3(6):1018-1025.
概述
原理 染色质免疫沉淀实验(CHIP)
方法 比较
举例 ➢ 研究体内DNA－蛋白质相互作用的重要 工具。 它不仅可以灵敏地检测目标蛋 白与特异DNA 片段的结合情况，还可以 用来研究组蛋白与基因表达的关系。
概述
原理 CHIP原理
方法
比较 在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物
举例
将其随机切断为一定长度范围内的染色质
概述
原理 应用举例
方法
比较
举例
Mantovani F, Tocco F, Girardini J, et al. The prolyl isomerase Pin1 orchestrates p53 acetylation and dissociation from the apoptosis inhibitor iASPP. Nat Struct Mol Biol. 2007 Oct;14(10):912-920.
方法
比较
举例
条 超声波破碎条件的选择
件 选
抗体量的选择
择 PCR反应条件的选择
对 Input对照
照 设
阳性对照：如组蛋白抗体
置 阴性对照：阴性引物
概述
原理 比较：
方法
比较 蛋白质-DNA相互作用常用方法
举例
凝胶电泳迁移率改变分析 （EMSA） DNaseⅠ足迹法（foot printing） 染色质免疫沉淀实验(CHIP)
体外 体内
概述
原理
方法
EMSA
比较
CHIP
举例 由于许多转录调控蛋 能真实完整地反映结 白有相似或相同的DNA 合在DNA序列上的调控
结合位点，EMSA获取 蛋白，是目前确定与
的结果不一定能真实 特定蛋白结合的基因
地反映体内转录调控 组区域或确定与特定 蛋白和DNA结合的状况。基因组区域结合的蛋
白质的最好方法。
二、免疫沉淀 利用目的蛋白质的特异抗体通过抗原
-抗体反应形成DNA-蛋白质-抗体复合体，然后沉淀此 复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段。
三、纯化与检测 经蛋白质与DNA 解偶联，DNA片段
纯化等处理后，用PCR等方法检测DNA与蛋白质的结合 情况.
概述 原理 方法 比较 举例
概述
原理 注意事项
Chromatin Immunoprecipitation Assay (ChIP)
染色质免疫沉淀实验
概述
原理 功能基因组学基因表达调控
方法
比较
➢基因表达:反式因子和顺式作用元件之
举例
间相互作用。
➢真核生物的基因组DNA以染色质的形式 存在。
➢研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相 互作用是阐明真核基因表达机制的基 本途径。
小片段
通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地 富集目的蛋白结合的DNA片段
对目的片断的纯化与检测
概述 原理 方法 比较 举例Βιβλιοθήκη 述原理 操作步骤方法
比较 一、固定 在活细胞状态下，用甲醛固定蛋白质－
举例 DNA复合物，然后用化学（微球菌酶）或者机械（超声 波）的手段将其随机切断为一定长度范围内的染色质 小片段。
概述
原理 扩展应用举例
方法
比较 ❖ CHIP-on-chip
举例
概述
原理 ❖crosslinking immunoprecipitation
方法 (CLIP)
比较
举例
For microRNA–mRNA interaction
Chi SW, Zang JB, Mele A, Darnell RB. Argonaute HITS-CLIP decodes microRNAmRNA interaction maps. Nature. 2009 Jul 23;460(7254):479-486.