综合实验沙棘组织培养实验方案设计及实施
实验目的：1 熟练掌握植物组织培养的基本原理
2 熟练掌握培养基的配制与消毒等操作
3 掌握组织培养外植体的消毒、接种、诱导等操作，能独立的完成植物组织培养
的各项设计及操作
实验原理：利用沙棘种子的培育出无菌的幼苗，在用无菌的幼苗的各个器官作为外植体进行培养。

沙棘种子不受接种时间限制，易于诱导;种子有果实包被，与外界环境接
触较少，相对茎段、根等外植体更容易消毒，机上种皮坚硬，消毒时对组织伤
害较小，植株容易成活并可减少褐化。

种子萌发出的无菌秒可分别选取上下胚
轴‘腋芽、子叶及胚根为外植体诱导分化，建立快繁体系.
实验材料; 沙棘种子
仪器：天平超净工作台解剖到枪型镊子刀片酒精灯等
药品：MS培养基次氯酸钠酒精无菌水等
实验步骤：
1、预处理
对试验台等操作工具进及沙棘的种子进行消毒处理及培养基的配制与消毒等准备工作
2、无菌幼苗的萌发
将消毒后的沙棘种子接种在灭过菌的培养皿中，使其萌发。

（培养皿中有两层无菌滤纸，用无菌水润湿）
3、前期消毒
对萌发的种子幼苗取其下胚轴进行消毒（升汞消毒:步骤与番茄无菌种子萌发的制备相同）
4、启动
将消毒好的外植体接入培养基中（启动分化培养基为1ö2M S+ 4 号细胞分裂素1. 0 mgöL+ 3 号生长素0. 2 mgöL + 琼脂代用品8 göL）
外植体接种于启动培养基后, 非染菌芽20 d 左右可见有芽萌发, 30～45 d 侧芽可长至3～ 5 cm
5、分化
外植体接种于启动培养基后, 非染菌芽20 d 左右可见有芽萌发, 30～45 d 侧芽可长至3～ 5 cm
6、诱导增殖
待诱导出芽后转于诱导增殖培养基,增殖分化培养后1. 5～ 2. 0 cm 长的单芽可用于生根培养, 在单芽转入生根培养基后, 在合适的培养基上7 d 左右可见芽基部长出白色粒状愈伤组织,很快生根。

（芽增殖培养基为M S+ 2 号细胞分裂素0. 5～2. 5 mg/L+ 3 号生长素0. 05～0. 25
mgöL + 0. 5% 活性碳+琼脂代用品8 g/L 。

7、诱导生根
转接于诱导生根培养基上，25 d 左右单芽可长成完整植株。

（生根培养基为1ö2M S+ 3 号生长素0. 1～0. 25mg/L + 琼脂代用品6 g/L）
8、瓶外炼苗
将试管苗置于20℃～25℃, 湿度60%～70% 温室大棚中, 揭开瓶盖5～6 d 后将菌取出, 用清水洗净培养基, 移栽于菌钵基质中, 并经常浇以营养液,约30 d 后幼菌可长至15～20 cm , 此时可移栽大田
9、移栽
实验结果及分析：。