第 27卷 第 9期 2 0 1 0年 9月
沈阳药科大学学报 Journa l of Shenyang Pharm aceutica lU nive rsity
文章编号: 100622858( 2010) 0920715204
V ol1 27 N o19 Sep12010 p1715
雷公藤根化学成分的分离与鉴定
F ig. 2 K ey NOESY cor r e la tion s of com p ound 1
化合物 2: 白色结晶 (氯仿 2甲醇 ), mp 193 ~ 195 e 。溴 甲酚绿 反应呈阳 性, 示 羧基的存 在。 ESI2M Sm /z: 487 [M - H ] - , 推测 其分 子式 为: C30H48 O5。1H 2NMR ( 300 MH z, Pyr2d 5 ) 谱 中: D 0187( 3 H, s, H 224)、0198 ( 3 H, s, H 225)、1102 ( 3 H, s, H 226)、1107( 3 H, s, H 227)、1104( 3 H, d, J = 5107 H z, H 229)为 5个甲基质子信号; D 3193、 3174(各 1 H, d, J = 1017 H z, H223), 4116 ( 1 H, br s, H 23), 4129( 1 H, m, H 22)为 3个连氧碳质子 信号; D 4175( 1 H, d, J = 1419 H z, H 220)为末端双 键质子信号; D5142( 1 H, br s)为 12位的质子信 号。 13 C2NMR ( 75 MH z, Pyr2d5 )谱给出 30个碳信 号 (见表 1), 比较化合物 1和 2的 13C 2NMR数据, 基本相似, 所不同的是化合物 2 的数据中的 C230 位的甲基信号消失, 多出一末端双键碳信号, 提示 C220、30 可 能 为 末 端 双 键。在 HMBC 谱 中, D 4177(H 230) 和 D 3718 ( C219 )、15318 ( C220 )、 3219( C221) 有相关, 结合 HMQC 谱进一 步确认 C220、30 为 末端双 键。 其 13C2NMR 数据 和文 献 [ 3]报道的 2A, 3A, 232三羟基乌苏烷 212, 20 ( 30) 2 二烯 2282酸基本一致, 故确定化合物 2为 2A, 3A, 232三羟基乌苏烷 212, 20( 30)2二烯 2282酸 ( 2A, 3A, 232trihydroxyurs212, 20 ( 30) 2dien2282oic acid), 为
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沈阳药科大学学报
第 27卷
硅胶吸附柱色谱, 以三氯甲烷 2甲醇系统 ( 200B1~ 1 B 1 ) 梯 度 洗 脱, 得 到 的 流 份 F r152 ~ 98 ( 100B110~ 100B115)经开放 ODS柱色谱, 高效液 相色谱分离得到化合物 1 ( 20 mg)、2( 14 m g)、3 ( 25 m g)、4 ( 6 m g); 石油 醚层和 氯仿 层萃取 物 ( 7115 g)进行硅胶柱色谱分离, 以石油醚 2丙酮系 统 ( 100 B1~ 1B1) 梯 度洗 脱, 流份 Fr1213 ~ 256 ( 100B8 ~ 100B9) 经 硅胶 吸附 柱 色谱、Sephadex LH 220柱色谱、高效液相色谱分离得到化合物 5 ( 7 m g)、6( 9 mg)、7( 6 mg)。
2 提取与分离
取雷公藤根 20 kg, 用体积分数为 95% 的乙 醇提取, 合并滤液, 减压浓缩后得浸膏 900 g; 将浸 膏加适量水稀释, 依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸 乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物 ( 2717 g)经
收稿日期: 2009212201 基金项目: 广东省自然科学基金项目 ( 7017651) 作者简介: 田洋 ( 19802), 女 (汉族 ), 辽宁沈 阳人, 硕 士研究 生, E2m a il jo joa lready@ 163. com; 王金辉 ( 19722), 男 ( 汉 族 ), 吉林通化人, 教授, 主要从事天然药物化学及中药炮制研究, Te.l 024223986478, E2m a ilw jh1972@ yahoo. com. cn。
公藤属植物中分离得到。
关键词: 雷公藤; 化学成分; 结构鉴定
中图分类号: R 914; R 2841 2
文献标志码: A
雷公藤 (Tripterygium w ilfordii H ook. f. )系卫 矛科雷公藤属植物, 又名黄藤、菜虫 药、断肠 草。 广泛分布于我国浙江、江西、安徽、湖南、广东、福 建、台湾等地。其性苦、寒, 有大毒, 具有杀虫、消 炎、活血通络、解毒 的功效 [ 1 ] 。近 年来广泛 用于 治疗类风湿性关节炎、肾小球肾炎、红斑狼疮、血 小板减少性紫癜, 近年来研究发现其具有抗炎、免 疫、抗生育、抗肿瘤、抗菌等活性 [ 2 ] 。雷公藤根的 化学成分, 文献报道中多为三萜类化合物、二萜类 化合物和生物碱 类化合物, 其他成分报 道很少。 为一步阐明其药效作用的物质基础, 对雷公藤根 的化学成分进行了系统研究, 从其根的体积分数 90% 乙醇提取物中分离、鉴定了 7个化合物, 其中 化合物 1、2、3、7为首次从雷公藤属植物中分离得 到。化合物 1~ 4的化学结构式见图 1。
雷公藤属植物中首次分离得到。 化合物 3: 白色结晶 (氯仿 2甲醇 ), mp 263 ~
266 e 。体积分数为 10% 硫酸乙醇溶液显蓝色; 溴 甲 酚 绿 呈 阳 性, 示 羧 基 的 存 在。 1H2NMR ( 300 MH z, CD3OD )谱中: D 0180( 3 H, s, H226)、 0189( 3 H, m, H 229)、0196 ( 6 H, m, H225、30 )、 1107( 3 H, s, H 223)、1113( 3 H, s, H 227)为 6个甲 基质子信号; D3139、3162(各 1 H, d, J = 1114 H z, H 224 ), 3174 ( 1 H, d, J = 214 H z, H 23 ), 3187 ( 1 H, m, H 22) 为 3 个连 氧碳 质 子信 号; D 5124 ( 1 H, t ) 为 12 位 的 质 子 信 号。 13 C2NMR ( 75 MH z, CD3OD ) 谱 给 出 30 个 碳 信 号 ( 见 表 1), 比较化合物 1和 3的13C 2NMR数据、HMBC 谱, 基 本 相 似。 所 不 同 的 是 在 NOESY 谱 中, D 3139、3162( H 224) 与 D 4113( H 23B)、4127 ( H 2 2B)有相关, 说明 C224位为羟甲基取代, C22、C23 分别为 A2OH 取代。其 13C 2NMR数据与文献 [ 4] 报道的 2A, 3A, 242三羟基乌苏烷 2122烯 2282酸基本 一致, 故确定化合物 3 为 2A, 3A, 242三羟基乌苏 烷 2122烯 2282酸 ( 2A, 3A, 242trihydroxyurs2122en2282 oic acid)。
田 洋1, 郝淑娟 1, 马跃平2, 张振学 1, 王金辉2
( 11 沈阳化工学院 化学工程学院, 辽宁 沈阳 110142; 21 沈阳药科大学 中药学院, 辽宁 沈阳 110016)
摘要: 目的 研究 雷公 藤 ( Tripterygium w ilfordii H ook. .f ) 根的 化学 成分。 方法 采用 硅胶 柱色 谱、
122en2282oic acid, 1)、2A, 3A, 232三羟基乌苏 烷 212, 20( 30) 2二烯 2282酸 ( 2A, 3A, 232tr ihydroxyurs212,
20( 30) 2d ien2282o ic ac id, 2)、2A, 3A, 242三 羟 基乌 苏烷 2122烯 2282酸 ( 2A, 3A, 242tr ihydroxyurs21、2A, 3A, 19A2三羟 基 乌苏 烷 2122烯 2282酸 ( euscaphic ac id, 4)、熊 果 酸 ( urasolic ac id,
5)、齐墩果酸 ( oleanolic ac id, 6) 、2S, 2cS2auran tiam ide aceta te( 7) 。结论 化合物 1、2、3、7为首次从雷
F ig. 1 S tr uctu r es of com pounds 124
Sephadex LH 220(美国 Pharm ac ia公司 ), 柱色 谱和薄层色谱硅胶 (青岛海洋化工厂有限公司 ), 所用试剂 (色谱纯和分析纯, 市售 )。
雷公藤药材, 购自辽宁省药材公司, 经沈阳药 科大学 孙启 时教 授鉴 定 为雷 公 藤 ( Tripterygium w ilford ii H ook. .f )的根。
1 仪器与材料
Bruker ARX 2300、AV 2600 核磁 共振 光谱 仪 ( TM S内标, 瑞士 Bruker公司 ), N 2000日立高效 液相色 谱 仪 ( 日 本 日 立 公 司 ), 制 备 型 色 谱 柱 YW C C18反相柱 ( 10 mm @250 mm, 5 Lm, 北京慧 德易科技有限 责任公司 ), MP2S3 显微熔 点测定 仪 (温度计未校正, 日本 Y anaco公司 )。
Sephadex LH220、开放 ODS柱色谱、HPLC等各种 色谱技 术对雷 公藤根 的化 学成 分进行 分离 纯化;
根据理化常数测定和光谱分 析对分离得到的化合物进 行结构鉴定。结 果 从雷公 藤根乙 醇提取物
中分离得到 7个化合物, 分别鉴定为 2A, 3A, 232三羟基乌苏烷 2122烯 2282酸 ( 2A, 3A, 232trihydroxyurs2
3 结构鉴定
化合物 1: 白色结晶 (氯仿 2甲醇 ), mp 193 ~ 195 e 。体积分数为 10% 硫酸乙醇溶液显蓝色; 溴甲酚绿 反应 呈阳 性, 示羧基 的存 在。 ESI2M S m /z: 487[M - H ] - , 推测其分子式为: C30 H48 O5。 1H 2NMR ( 300 MH z, Pyr2d5 )谱中: D 0184 ( 3 H, s, H 224)、0191 ( 3 H, d, J = 519 H z, H 230 )、0194 ( 3 H, d, J = 613 H z, H 229)、0197( 3 H, s, H 226 )、 1104( 3 H, s, H 225)、1111( 3 H, s, H 227)为 6个甲 基质子信号; D3190、3174(各 1 H, d, J = 1017 H z, H 223), 4113( 1 H, m, H 23), 4127( 1 H, m, H 22)为 3个连氧碳质子信号; D 5144( 1 H, br s)为一双键 上质子信号。 13 C 2NMR ( 75 MH z, Pyr2d5 )谱中给 出 30个碳信号 (见表 1): D17918为 28位羧基碳 信号, D 12515、13913为乌苏烷型 12、13位特征烯 碳信号, D 7819、7112、6612 为 3 个连 氧碳信 号。 在 NOESY 谱中 (见图 2), 可见 D 0184 (H 224)与 D4113(H 23B)、1104( H 225 )有相关, 同时 D 4113 (H 23B)与 D 4127 (H 22B)有相关, 说明 C223位为 羟甲基 取 代, C22、C23 分 别 为 A2OH 取 代。其 13C2NMR数据与文献 [ 3]报道的 2A, 3A, 232三羟 基乌苏烷 2122烯 2282酸基本一致, 故确定化合物 1 为 2A, 3A, 232三羟基乌苏烷 2122烯 2282酸 ( 2A, 3A, 232trihydroxyurs2122en2282oic ac id ), 为 雷 公藤 属 植物中首次分离得到。