处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗原检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
乙肝两对半的检测
临床免疫学教研室 邓念华
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法
竞争抑制法 竞争抑制法
7.洗液如有结晶形成建议放置37℃充分溶解， 再稀释；
8.洗板：(洗板机) 1)每次使用前、后用蒸馏水或去离子水冲洗，
以防止管路堵塞和腐蚀； 2)加液量不能过多溢出，但又能充满整个反应
微板(350ul); 3)一般洗板次数不应少于5次； 4)最好采用有底部冲洗和两点冲洗的程序。
【器材】
BIORAD680型自动化酶免分析仪、 BIORAD全自动酶标洗板机、微 量加样器、吸头等
【试剂】
HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒 HBeAgELISA试剂盒 HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒
【标本】
待测血清
【操作步骤】
表面抗原检测(夹心法)
性（样品作1：30稀释） 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断： COV=0.5×N
阴性对照A≥1.0 ，阳性对照A≤0.5 ，否则 实验无效。 S≤COV 阳性 S＞COV 阴性
c抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品：加入待测样品或阳性、阴性对照
75ul/孔，轻轻振荡混匀； 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应60min; 5. 加酶结合物： 每孔加入50ul/孔
7. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 8. 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 9. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液
B50ul，混匀，贴上封膜，37℃反应 30min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
处测定吸光度)
结果判断： COV=0.5×N
阴性对照A ≥1。0 ，阳性对照A ≤0.50 ， 否则实验无效。 S≤COV 阳性 S＞COV 阴性
【注意事项】
1.不同品种及批号试剂组份请勿混用； 2.试剂从2-8℃条件下取出，先在室温平衡1h； 3.最好用微量移液器加各种组份； 4.每次手工加样，应更换吸头； 5.加样时尽量避免反应微孔中产生气泡； 6..封板膜不能重复使用；
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时