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9. 弃上清，在沉淀中加入 100-200ul 蛋白提取液 C，充分混匀。 10. 轻微振荡 15-30 分钟，至无明显沉淀。
【注】： 用振荡器或脱色摇床/平板摇床保持液体有轻微的晃动即可，没有 2-8℃振荡条件时室 温振荡即可。
11. 在 4℃，14000g 条件下离心 15 分钟。 12. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到溶酶体总蛋白。 13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
提取液准备： 每 200ul 冷的蛋白提取液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备 用。
【注】： 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入 提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制 剂。
细胞溶酶体蛋白提取： 1. 取 1-2×107 个细胞，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基， 尽可能吸干，收集细胞； 2. 用冷 PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 加入 400μl 冷的试剂 A，置冰上振荡 10 分钟。 4. 用 Dounce 匀浆器匀浆 30-40 下，然后在 4℃，1000g 力条件下离心 5 分钟。 5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。 6. 在 4℃，30000g 力条件下离心 30 分钟。 7. 在沉淀中加入 400μl 冷的试剂 B，混匀。 8. 在 4℃，30000g 力条件下离心 30 分钟。
常见问题分析： 蛋白浓度低？ 溶酶体蛋白丰度较低，需要足够的样品量才能得到足够的蛋白，在条件允许的情况 下，适当增加细胞或组织样本的上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全， 导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处 理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 用什么方法定量蛋白？ 建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂 C 中含有干扰 Bradford 法的组份， 导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。 提取的蛋白具有活性吗？
产品特点： 1、 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。 2、 提取过程简单方便。
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3、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 4、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 5、 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结
合释出的蛋白防止沉淀。 6、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包
产品更新： 贝博生物 BestBio 会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书 会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照 网上下载的说明书，可能是不同的版本。 需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如 果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
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本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的 相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
相关产品：
产品 总蛋白提取试剂盒 核蛋白提取试剂盒 膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒 Bradford 蛋白定量试剂盒 ECL 化学发光检测试剂盒 细胞蛋白提取试剂盒 组织蛋白提取试剂盒 细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 昆虫蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 总蛋白提取试剂盒（2D 电泳用） 植物蛋白提取盒（2D 电泳用） 细菌膜蛋白提取盒（2D 电泳用）
溶酶体蛋白提取试剂盒
货号：BB-31452
试剂盒储存条件： 2-8℃保存。
试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成 规格
试剂 A：溶酶体提取液 A 试剂 B：溶酶体提取液 B 试剂 C：溶酶体蛋白提取液 C 试剂 D：蛋白酶抑制剂混合物
使用说明书 各组份储存条件：
蛋白提取液 2-8℃保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 磷酸酶抑制剂 2-8℃保存。
产品简介： 溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有 40 多种水
解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是对细胞内物质的消化作用。 此外溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。
本试剂盒 贝博 TM BBproExtraTM 溶酶体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，可用于各种动物细胞和实体 软、硬组织样本的溶酶体蛋白提取。适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、 脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组 织中提取溶酶体总蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物， 阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录 活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于 2D 电泳，如下游实验需 要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后 再用于 2D 电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品 BB-38113）。
【注】： 用振荡器或脱色摇床/平板摇床保持液体有轻微的晃动即可，没有 2-8℃振荡条件时 室温振荡即可。
11、在 4℃，14000g 条件下离心 15 分钟。 12、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到溶酶体总蛋白。 13、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】： 建议用 BCA 法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3702 BB-3181 BB-3183 BB-3187
产品 磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 活性蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 植物核蛋白提取试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 真菌蛋白提取试剂盒 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE 上样 Buffer 细菌蛋白提取盒（2D 电泳用） 酵母蛋白提取盒（2D 电泳用） 线粒体蛋白提取盒（2D 电泳用）
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 B BB-3185 BB-3191
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试剂盒以外自备试剂耗材和仪器
● PBS
● 吸头、离心管
● 移液器 ● 冰盒
● 离心机 ● 涡旋振荡器
● 冰箱
使用方法：
使用注意事项： 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体 洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低 温。 最好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有 Dounce 匀浆器，用普通 1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。 若实验室离心机较小达不到 30000g 离心力，或者离心管质量不能承受 30000g 离心力，请 使用能达到的最大离心力。
BB-31452-1 50T 25ml 25ml 10ml
100ul 1
有效期： 一年。
BB-31452-2 100T 50ml 50ml 20ml 200ul 1
V2.16
组份编号 31452A 31452B 31452C 31452D
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
含 6 种独立的蛋白酶抑制剂 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、 E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成 使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、 天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
质量控制： 贝博对每批产品进行严格测试以确保产品质量一致。
知识产权： 贝博 TM BBproExtraTM 系列试剂盒及其使用方法包含专有技术。
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注意事项： 1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 2. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 3. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 4. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 5. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
【注】： 建议用 BCA 法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织溶酶体蛋白提取： 1、 取 50-100mg 新鲜动物组织样本，用 PBS 洗涤干净。 2、 用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。 3、 加入 400μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。 4、 用 Dounce 匀浆器匀浆 30-40 下，然后在 4℃，1000g 力条件下离心 5 分钟。 5、 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。 6、 在 4℃，30000g 力条件下离心 30 分钟。 7、 在沉淀中加入 400μl 冷的试剂 B，混匀。 8、 在 4℃，30000g 力条件下离心 30 分钟。 9、 弃上清，在沉淀中加入 100-200ul 蛋白提取液 C，充分混匀。 10、轻微振荡 15-30 分钟，至无明显沉淀。