仅杀死物体表面或内
部一部分对人体有害 的微生物(不包括芽孢 和孢子)
煮沸消毒法、 巴氏消毒法、 紫外线或化学 药物消毒法
灭 菌
强烈的理化 因素
杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和 孢子
灼烧灭菌、干 热灭菌、高压 蒸汽灭菌
特别提醒 实验后所有用过的培养基、培养液都要统一进 行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染。实验过 程中一定不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手， 以防止被微生物感染。
病的原_微__生__物_____有_和害_微__生__物__的__营__养__细__胞______ ，常用的是 射线_____消毒法化和学_药__剂______消毒法。
[思维激活1] 用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70% 与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？ 提示 酒精擦拭属化学消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀 菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固 成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌 力减弱。
异养型 微生物
CO2、 NH3、铵盐、
NaHCO3 硝酸盐等
糖类、脂 肪酸等
铵盐、 硝酸盐、 蛋白质等
生长因子
一般不 需要
有些种 类需要
举例
硝化 细菌
乳酸菌
2.培养基的成分 (1)培养基的成分 培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源、生长因子五 大类营养物质。 (2)碳源、氮源及生长因子的来源与功能比较
方法
灭菌操作
适用对象
灼烧 灭菌
在酒精灯火焰的充分 燃烧层灼烧
对接种环、接种针或其他 金属工具灭菌，也可以对 试管口、瓶口灭菌
干热 灭菌
在干热灭菌箱内， 耐高温且需保持干燥的物
160～170 ℃条件下， 品，如玻璃器皿和金属用
加热1～2 h
具等
高压蒸 汽灭菌
在高压蒸汽灭菌锅内， 121 ℃，100 kPa，灭 菌15～30 min
【巩固2】 下列有关平板划线的操作正确的是
( )。
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上
塞上棉塞
C．把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划
三至五条平行线即可
D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
解析 考查平板划线操作。平板划线操作时要时刻注意两个
培养基、发酵设备等
示例二 微生物的纯化培养
【例如2图】是微生物平板划线示意图，划 线的顺序为1―→2―→3―→4―→5。下
列操作方法正确的是
( )。
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
观察微生物的运动、 鉴定菌种等
液体 培养基
不加凝固剂，呈液态 常用于工业生产
特别提醒 平板培养基是固体培养基的一种。
(2)按照培养基的用途分类
种类
制备方法
用途
选择培 加入某种化学物质或除 从众多的微生物中分
养基 去某些营养成分
离所需微生物
鉴别培 养基
加入某种试剂
鉴别不同种类的微生 物
基础培 养基
不另加其他物质或试剂
D．③④②①⑥⑤
思维导图：
深度剖析 培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需 用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效 果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用70% 的酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其 营养成分可采用巴氏消毒法。 答案 A
归纳提升 几种常用灭菌方法比较
入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除
水以外的无机物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是 氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，
如NH3可以为硝化细菌提供能量。 答案 A
Байду номын сангаас
大肠杆菌的分离和纯培养
1．培养基类型 牛肉_膏__蛋__白__胨__琼__脂______培养基。
2．接种 采平用板_划__线__分__离__法______进行接种。划线的方法包括
酸、尿素、氨基酸 及含氮的代谢产物
生长因子
维生素、氨基酸、碱 基
①酶和核酸的组成 成分；②参与代谢 过程中的酶促反应
3.培养基的种类 培养基的种类很多，可以从不同的角度进行分类。
(1)按照物理性质分类
种类
固体 培养基
特点 加凝固剂，呈固态
作用
微生物的分离、计 数、保藏菌种等
半固体 培养基
加少量凝固剂，容器放 倒不致流出，剧烈震动 则破散
营养成分 无机碳源
碳 源 有机碳源
无机氮源 氮 源
有机氮源
来源
功能
CO2、NaHCO3、 CaCO3等含碳无机物
①构成细胞物质和 一些代谢产物；
糖类、脂质、蛋白质、②有机碳源既是碳
有机酸、石油、花生 源又是能源
粉饼等
无机氮：NH3、铵盐、 将无机氮合成含氮
硝酸盐、N2等
的代谢产物
牛肉膏、蛋白胨、核 合成蛋白质、核酸
2．培养基 (1)培养基的概念：根据微生生物长__繁__殖______代和谢_____的需要， 将各种__营__养__物__质_混合在一起，配制成适合微生物生存的 营养基质——培养基。
(2)平板培养基 将溶化后固的体_____培养基基质倒无入菌_培__养__皿_____冷_，却__凝_____ 固 ___后制成的培养基称为平板培养基。 3．接种 (1)接种的概念：把相应研的究__对__象_____移入培养基中的过程 称为接种。 (2)接种的方法：在平板培养基上的接种方法平有板_划__线______ 法 __稀_、释_涂__布__平__板__法_____ 、稀释混合平板法。 (3)纯培养的概念：将所需要的微生物混从杂__的__微__生__物__群_____ 体 ___中分离出来，获纯得种_____微生物的过程称为纯培养。
(3)试管口灭菌 在酒精灯火焰附近冷却接种环。左手拿取混合菌液试管，让 试管口缓缓通过火焰灭菌。 (4)沾取混合菌液 将接种环伸入试管内，沾取一环混合菌液。 (5)接种 左手持培养皿并开启一条缝隙，右手将接种环迅速伸入平板， 进行划线。划线的方法包括连续划线法和交叉划线法。 ①连续划线法是从平板边缘的一点开始，连续作紧密的波浪 式划线。 注意：a.画线的方向应该从一个方向开始；b.线条要细且密； c.不要重复画线。
【巩固1】 下列说法正确的是
( )。
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基
C．除水以外的无机物只能提供无机盐
D．无机氮源不可能提供能量
解析 本题主要考查了微生物培养中培养基的含义、类型、
营养等方面的知识。根据培养基的物理性质，可分为液体
培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加
②交叉划线法是从平板的一边作第一次平行划线若干条。
转动培养皿约70°角，将接种环在火上灼烧并冷却后，通
过第一次划线部分，作第二次平行划线。同法进行第三次、
第四次划线。
特别提醒 交叉划线法操作注意事项：
操作第一步即取菌种之前及第二次及以后每次划线之前都
需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种
后如果发现有杂菌，可进一步__划__线__挑__菌_，直至__纯__化_。
5．微生物的培养条件 大多数微生物适宜生长的温度是25_～__4_0___℃之间，实验室中 常采用28_～__3_0___ ℃培养微生物。一般的细菌适合于中___性环 境生长，放线菌适合于偏_碱____性环境，酵母菌和霉菌适合于
微量元素组成，这些元素最终来自外界环境中各种有机物
和无机物，可归纳为碳源(主要提供C元素)、氮源(主要提 供N元素)、水(提供H、O)、无机盐(提供大量元素和微量 元素)和生长因子五大类。 (4)代谢类型与营养物质的关系 自养型微生物和异养型微生物的营养物质比较：
营养
物质 碳源
氮源
类型
自养型 微生物
连续_划__线__法_____交_和叉_划__线__法______。 3．培养
划线完毕后，盖上培养皿盖，将培养倒皿置______，放入 37 ℃_的__恒__温___培__养__箱_____中培养24 h。
4．纯化培养
挑取单_个____大肠杆菌菌落接种到培养基上，仍在37__℃__恒___ 温_培__养__箱_____中培养24 h，可获得大肠杆菌的纯_培__养____。检查
微_酸____性环境。
[思维激活2]
微生物接种技术中最核心的内容是什么？
提示 所有微生物接种方法中最核心的内容是防止杂菌污
染，保证培养物的纯度。
1．培养大肠杆菌的培养基 (1)名称 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 (2)主要成分与作用
培养基组分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O
提供的主要营养物质 碳源、磷酸盐和生长因子
4．无菌技术 (1)采用无菌技术的原因与要求 ①原因：在微生物的分离和纯培养中，一定不能外有来_的_____
污染_性__杂__菌_______。 ②要求：在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严 格灭的菌_____，对工作场所进消行毒_____ 。 (2)灭菌和消毒 ①灭菌是指用强烈理的化_因__素______杀死环境或物体内所外有_____ 的微生物，常用的高是温_灭__菌______法。 ②消毒一般是相用对_温__和______的理化方法杀死环境或物体上
环，每次灼烧目的如下表：
取菌种之前 第二次及以后每次划线之前 划线结束
杀死上次划线后接种环上残 杀死接种环上
目 的
杀死接种环 上原有的微 生物
留的菌种，使下次划线的菌 种直接来源于上次划线的末 端，使每次划线后菌种数目
残存的菌种， 避免细菌污染 环境和感染操
减少
作者
3.大肠杆菌的培养 (1)培养 将培养皿倒置的原因：将平板倒置，既可以使培养基表面 的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基， 造成污染。 (2)观察记录 将观察到的大肠杆菌的菌落特征记录于下表。