分离导入了目的基因的 受体细胞 分离杂交瘤细胞
3.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
⑴碳源
无机碳源：CO2、CO32-、 HCO3-
自养微生物
有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等 异养微生物
⑵氮源 无机氮源：NH4＋、NO3有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
巴氏消毒 70 ～75℃,30min；牛 Nhomakorabea等不宜高温
75℃,15min
消毒灭菌的
化学药剂消毒 酒精、氯气、石炭 实验者的手臂、 酸、煤酚皂溶液 实验台等
紫外线消毒 用紫外线照射 30min
接种室内空气、接 种箱、超净工作台
（2）灭菌
灭菌方法
适用对象
所需条件
灭菌时间
灼烧灭菌
接种的工具、 酒精灯火焰充 试管口、瓶口 分燃烧层灼烧
第一章 :无菌操作技术实践
微生物基础知识
病毒
细菌
微生物包括哪五类： 放线菌
病毒界 原核生物界
真菌
真菌界
原生动物 原生生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通 常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有 的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿 素.不能进行光合作用.
细菌的构造
图1-3 细菌的结构
气压100Kpa、温度 121℃、维持20—30分钟。 5、出锅
压力表指针将至“0”点，温度下降。
微生物实验室培养的基本 操作程序
●器具的灭菌 ●培养基的配制 ●培养基的灭菌 ●倒平板 ●微生物接种 ●恒温箱中培养 ●菌种的保存
（二）培养基
1.概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，
配制出供其生长繁殖的营养基质。
半固体培养基
用于动力检测、 保种
无动力 有动力(弥散)
液体培养基（用于增菌） 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
（3）按功能划分：
基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。 选择培养基：培养基加入某种物质或缺少某种营养 物质而抑制不需要的微生物生长促进需要的微生物 生长。
如：加链霉素培养基或者加青霉素培养基抑制 细菌和放线菌的生长，筛选真菌。
常用方法
①煮沸消毒法 ②巴氏消毒法 ③化学药剂消毒法 ④紫外线消毒法
强烈的理化因素 杀死所有的微生物
包括芽孢和孢子
①灼烧消毒法 ②干热灭菌 ③高压蒸汽灭菌
适用对象 操作空间、液体、 接种环、接种针、玻
双手等
璃器皿，培养基等
（1）消毒
方法
条件
适用范围
煮沸消毒法 100℃,5～6min 日常食物、罐装 食品
烧红
干热灭菌 高压蒸汽灭菌
耐高温需干燥 干热灭菌箱
的物品（玻璃 （160℃～170
器皿等）
℃）
培养基、实 验器材
100kPa，121 ℃
1～2h
15～ 30min
灼烧灭菌
干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅
湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 过程：
1、加水 2、装锅 3、加热排气 维持2—3min,排出冷空气 4、保温保压
菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
菌落
细菌的菌落特征因种 而异
放线菌
1、结构： ➢单细胞原核 ➢分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
应用:
链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素
无氮培养基抑制非固氮菌生长，筛选固氮菌 鉴别培养基：区别微生物
伊红——美蓝培养基 产气杆菌菌落大、灰棕色 大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽
培养基 加入青霉素
加入高浓度食盐 不加氮源 不加含碳有机物的无碳 培养基 加入青霉素等抗生素
加入氨基喋呤、次黄嘌 呤和胸腺嘧啶核苷
应用 分离酵母菌、霉菌等真 菌 分离金黄色葡萄球菌 分离固氮菌 分离自养型微生物
2.类型：
按化学成分划分：
按物理性质划分：
按功能划分：
（1）按化学成分划分：
天然培养基
化学成分不恒定的天然有机物
如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基
合成培养基
化学成分完全了解的物质配制而成的培养基
如：高氏1号培养基、葡萄糖铵盐培养基。用于分类 和鉴定
（2）按物理性质划分：
固体培养基： 用于纯化、增菌。
※蛋白胨:动物蛋白初步消化的产物，富含有机氮化合物， 也含有一些维生素和糖类。主要提供氮源和维生素。
（一）制备培养基
计算称量溶化调节pH灭菌倒平板
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1.将培养皿放在火焰旁的桌面上， 右手拿装有培养基的锥形瓶，左手 拨出棉塞。
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2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过 火焰。
3.用左手将培养皿打开一条稍大于 瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培 养基(约10～20mL)倒入培养皿，左 手立即盖上皿盖。
边做边学：大肠杆菌的接种与分离培养
(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g
将上述物质溶解后，添加自来水，定容至 1000mL
※牛肉膏：新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而 成，含有多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物 质类及维生素类的水溶性物质。提供碳源、氮源、能源、 磷酸盐和维生素。
细菌细胞由外向里 依次有鞭毛、菌 （纤）毛、荚膜 、细胞壁、细胞 膜、细胞质，细 胞质中又有液泡 、储存性颗粒、 核质等。
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休 眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶 劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小 时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜 （如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个 细菌.
微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是 由放线菌产生的
病毒
2、病毒的增殖：
真菌
酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
细菌的营养类型
根据细菌所利用的能源和碳源的不同 ，将细菌分为两大营养类型。
自养菌（autotroph）
异养菌（heterotroph）
腐生菌
寄生菌
大部分病原菌
课题研究背景：
微生物研究和应用的前提： 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物 如何获得纯净培养物？ ①合适的营养和环境条件 ②确保其他微生物无法混入
一 无菌技术
无菌的意义：防止外来杂菌的污染
思考： 1.操作中哪些地方需要无菌？ 2.怎样控制无菌？
1.无菌的方法
（1）消毒
（2）灭菌
概念
较为温和理化方法 杀死部分有害微生物 (不包括芽孢和孢子)