实验二 温度、pH 值、激活
剂和抑制
剂对酶活
性的影响
及特异性
一、实验目的
1．通过实验，观察温度、pH值、激活剂与
抑制剂对酶促反应速度的影响。
2．能运用所学的生化知识对实验结果进行
正确的分析。
二、实验原理
淀粉
＋ ↓
糊精
＋ ↓
麦芽糖和葡萄糖 碘 无色
↓ ＋
碘
蓝 色
碘 紫色→红色→无色
• 利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在 不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pH、激
（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响
管号
1%淀粉溶液 pH6.8缓冲液
1
10滴 10滴
2
10滴 10滴
3
10滴 10滴
4
10滴 10滴
蒸馏水
氯化钠溶液 CuSO4溶液
2滴
— —
—
2滴 —
—
— 2滴
—
— —
Na2SO4溶液
稀释唾液
—
5滴—5滴—5滴2滴5滴
把三支管摇匀，然后放至 37℃水浴10分钟，加碘2滴摇匀
煮沸唾液
水浴温度 结果与分析
10滴
37℃
把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴10分钟，加碘2滴
• 取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每 隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴， 加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化， 直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时）， 向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化(切 记勿摇动)。摇匀再观察。
三、实验材料
1.1%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g, 加5ml蒸馏水, 调成糊状, 再加80ml蒸馏水, 加热并不断搅拌, 使其充分溶解, 放冷, 最后用蒸馏水稀释至 100ml。
2.pH3.0缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液205ml， 0.1mol/L柠檬酸溶液795ml, 混合即成. 3.pH6.8缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液772ml， 0.1mol/L柠檬酸溶液228ml, 混合即成.
动剂和抑制剂对酶的活性影响。
二、实验原理
在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚 至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速 度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶 促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适 温度在37℃左右。温度过高，酶变性失活，酶促 反应速度下降，甚至停止。 每种酶都有最适的pH值，在最适pH值时，酶的活 性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pH均 可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉 酶的最适pH值为6.8。 氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液 淀粉酶有抑制作用。
（一）温度对酶促反应速度的影响
管号 缓冲液（pH6.8） 1%淀粉溶液 预温温度 稀释唾液 1 20滴 10滴 0℃ 10滴 — 0℃ 2 20滴 10滴 37℃ 10滴 — 37℃ 3 20滴 10滴 37℃ —
把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温
预温5分钟后取出，继续向各管加入相应唾液
（二）pH对酶促反应速度的影响
管号
1%淀粉溶液 pH5.0缓冲液 pH6.8缓冲液 pH8.0缓冲液 稀释唾液 — 5滴
1
10滴 10滴
2
10滴 — 10滴 — 5滴
3
10滴 — — 10滴 5滴
把三支管摇匀，然后放至 37℃水浴10分钟，加碘2滴摇匀
结果与分析
• 将各管混匀，放进37℃水浴箱
中保温。 • 取白瓷板一块，向各凹分别加 1滴碘液，每隔半分钟用滴管 或玻棒从2号管取溶液1滴，加 到已加有碘液的小凹中，观察 颜色变化，直至与碘不呈色时 （即只显棕黄色时），向各管 加碘液1滴，摇匀观察颜色变 化。
结果与分析
• 将各管摇匀，放进37℃水 浴箱中保温。取白瓷板一 块，向各凹分别加1滴碘 液，每隔半分钟用滴管或 玻棒从2号管取溶液1滴， 加到已加有碘液的小凹中， 观察颜色变化，直至与碘 不呈色时（即只显棕黄色 时），向各管加碘液1滴， 摇匀，观察各管颜色变化。
激活剂与抑制剂
五、思考题 1. 什么是酶的最适温度？ 2. 什么是酶的最适pH? 3. 激活剂与抑制剂对酶活性影 响实验中设置第四管的作用 是什么？ 4. 什么是酶的特异性？
酶的专一性
激活剂与抑制剂
（四） 酶的专一性对酶促反应的影响。
加入物 1号管 2号管 3号管
PH值6.8缓冲液 1%的淀粉 1%的蔗糖 煮沸唾液
稀释唾液
20滴 10滴 —— ——
5滴
20滴 10滴 —— 5滴
——
20滴 ——
10滴 —— 5滴
结果与分析
（2）混匀，37 ℃水浴10min，分别加入班氏试剂20滴。 （3）各管摇匀置于沸水煮沸8-10min，观察结果并记录。
4.pH8.0缓冲液 取0.2mmol/LNa2HPO4溶液972ml， 0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即成.
5.0.9%NaCl溶液 6.1% CuSO4溶液 7.碘液 9.试管架 11.试管夹 12.滴管 13.白瓷板 14.恒温水浴箱 15.电炉 16.烧杯
【注意事项】
1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应
结果
2.各管反应时间应严格控制，保证一致。
四、实验方法
• 稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟 后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶 活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验， 有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过 程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用 量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应 太快，则减少稀释唾液的用量） • 煮沸唾液的制备 取上述唾液约5ml，放入沸水中 煮沸5分钟，取出备用。