LCE主要用于药物的分离 ,而用于测定药物脂水分
配系数的报道则不多见 [ 4, 5 ] 。本文采用 LCE 法 ,通
过利用 5种标准化合物的 tm值及其 logP 值进行非 线性拟合 ,测定 6种药物的脂水分配系数 ,并与摇瓶
法测定的值进行比较 ,建立一种测定药物脂水分配
系数的快速 、有效的新方法 。
电泳 :电泳前分别用 011 mol·L - 1 NaOH、蒸馏 水及电泳运行缓冲液冲洗毛细管 10 m in, 2 次电泳 之间 用 蒸 馏 水 及 运 行 缓 冲 液 冲 洗 5 ～ 10 m in; pH710;电迁移进样 , 15 kV ×5 s;电压 15 kV;检测波 长为 210 nm。 3 结果与讨论 311 5种化合物与待测药物荷电情况的考察
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测定药物在生物膜上的分配系数 ( P)可以了解 药物在生物膜上的分配状况 、活性 、毒性 、体内分布 及其他生理过程 [ 1 ] ,这对药物设计和药物筛选来说 十分重要 。在生理 pH 5. 5 ～7. 5 内 ,许多药物部分 或完全解离 ,由此与生物膜产生静电吸附或排斥作 用 。传统的正辛醇 /水系统评价的只是非解离药物 膜透过性 。由于脂质体的双分子脂质层在结构和组 成上都与生物膜极为相似 ,能够模拟药物结合到生 物膜表面或分配到生物膜脂双层时发生的疏水 、静
DUAN Chun - yan1 , GONG Ping1 , GAN Xiao - ling133 , ZHANG Ya - hong1 ,WANG L i1 , X IA Zhi - ning2
( 1. Chongqing Medical and Pharmaceutical College, Chongqing 400030, China; 2. Institute of Chem istry and Chem ical Engineering, Chongqing University, Chongqing 400030, China)
电等相互作用 ,因此脂质体 /水体系成为理想的评价 药物与生物膜相互作用的模型 [ 2 ] 。脂质体毛细管 电泳 (LCE)是借助毛细管电泳高效快速的特点 ,将 脂质体溶液加入到毛细管中作为运行溶液 ,脂质体 作为一个假固定相 ,药物的迁移行为反映了其与脂 质体的相互作用 。
LCE是依据药物在水相和脂质体相中分配的差 异进行药物脂水分配系数 ( P )值的测定 ,通过以下 式 [ 3 ]测定药物的 logP值 :
加入 pH 为 710 的磷酸盐缓冲液 ( 10 mmol·L - 1 ) ,
超声使磷脂膜均匀地分散在缓冲液中 ;将得到的溶 液挤压通过孔径为 0145 μm 的滤膜和 0122 μm 的 滤膜各 3 次 , 最终得到颗粒大小较均匀的脂质体 溶液 。
样品的配制 :将药物分别溶解于磷酸盐缓冲液 中 ,制成 1～5 mmol·L - 1的溶液 ,备用 。
药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2010, 30 (3)
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测定药物脂水分配系数的脂质体毛细管电泳方法研究 3
段春燕 1 ,龚萍 1 ,甘晓玲 133 ,张亚红 1 ,王丽 1 ,夏之宁 2
(1. 重庆医药高等专科学校 ,重庆 400030; 2. 重庆大学化学化工学院 ,重庆 400030)
1 仪器与试剂
自组装毛细管电泳仪 (重庆大学化学化工学
院 , 0～30 kV 高压输出 ,紫外 - 可见光谱单色系统 ,
光电倍增探测器 ) ;数据采集和处理 : HW - 2000 色 谱工作站 ;未涂层熔融石英毛细管 (内径 75 μm ,总
长 50 cm ,有效长度 42 cm ,河北永年锐沣色谱器件
LCE测定药物的脂水分配系数 logP,主要是基 于药物在脂质体和水相中的分配作用 ,若被测药物 带电荷 ,那么它除了存在分配作用之外 ,自身还具有 有效淌度 ,因此 ,药物是否呈电中性与测定的 logP 值的准确度有直接关系 。为验证所选择 6种待测药 物在所选定的脂质体运行介质中是否带电荷 ,本文 采用了与脂质体背景电解质相同的毛细管区带电泳 (CZE)来测定 6种待测药物的有效淌度 。将各种药 物分别与电渗流标记物 DM SO 混合后进行电泳 ,得 到如图 1的谱图 。从图 1可以看出 ,盐酸可乐定 、地 尔硫 及西酞普兰和在 pH 为 710 的磷酸盐缓冲液 中带正电荷 ;氯霉素呈电中性 ;酮基布洛芬与布洛芬 带负电荷 ;当操作电压分别为 18, 13及 10 kV 时 ,各 物质的出峰时间均有变化 ,但与 DM SO 的相对位置 不变 。 312 脂质体相的迁移时间 tm的求解以及标准曲线 的建立 计算药物的保留因子 k需要脂质体的迁移 时间 tm 。文献报道的脂质体的标记物质有壬基苯酮 ( decanophenone) 、苏丹 Ⅲ等 ,即强亲脂性且不带电 的物质 。但在运行液中含有有机溶剂时 ,所选标记 物会在脂质体和溶液本体水相间产生分配 ,标记物 的出峰时间会提前 ,并不能代表脂质体的出峰时间 , 这会对保留因子的计算产生很大的误差 。这时应该 采用迭代法 [ 7 ] 推算脂质体的迁移时间 。本文通过 利用 5种标准化合物的 tm及其 logP 值进行非线性
药物技术有限公司提供 ;实验室用水为普通蒸馏水 ;
微孔滤膜购于上海新亚净化器件厂 , 孔径分别为 0145μm 和 0122μm 。
2 实验方法
脂质体制备 [ 6 ] : 精密称取一定量的卵磷脂 ,用
适量氯仿溶解 ,在旋转蒸发仪上减压蒸发氯仿 ,温度
为 35～40 ℃,使卵磷脂在圆底烧瓶内形成一层膜 ;
有限公司 ) ; AS3102 超声波清洗器 (天津奥特赛恩
斯仪器有限公司 ) ; TGL - 16B 型台式高速离心机
(上海安亭科学仪器厂 ) 。
卵磷脂购于北京华清美恒天然产物技术开发有
限公司 ;磷酸盐与其他试剂均为分析纯 ; 盐酸可乐
定 、氯霉素 、布洛芬 、酮基布洛芬 、西酞普兰 、地尔硫
均为原料药 (纯度均在 9915%以上 ) ,重庆市莱美
采用与脂质体溶液背景电解质相同的毛细管区 带电泳 ( CZE)考察苯胺 、苯酚 、甲萘胺 、乙萘酚及萘 的有效淌度 。结果表明 ,所有化合物皆与电渗流标 记物二甲亚砜 (DM SO )同时出峰 ,说明这几种化合 物的有效淌度为 0,即这 5 种化合物在所选定条件 下呈电中性 ,可以作为标准化合物 。
Abstract O bjective: To measure lip id - water partition coefficients ( P ) of pharmaceuticals by LCE method. And its logarithm ( logP) values of six pharmaceuticals determ ined by this LCE m ethod were compared w ith literature val2 ues. M ethod: The m igration time of liposome phase ( tlip ) was obtained by non - linearity fitting w ith logP values from literature and measured m igration time ( tm ) of a series of standard compounds, a calibration curve for estimating logP of pharmaceuticals was thus obtained. Results: The logP values of 3 pharm aceuticals measured by LCE m ethod using the different liposome were close to the literatures, and the average RSD was 5. 7%. The logP values of 6 pharmaceuticals m easured by LCE method were close to those determ ined by shake - flask method, and the average error between values from two methods was 0. 30. Conclusion s: This m ethod is simp le, rap id, rep roducible and relia2 ble, which can be useful to estimate lip id - water partition coefficients of pharmaceuticals. Key words: liposome; cap illary electrophoresis; lip id - water partition coefficients
截距 。
中性不带电药物按公式 (1)和 ( 3)计算 ,若药物
带电 ,则必须考虑到溶质本身的电泳对其保留因子
的影响 ,计算公式为 ( 2)和 ( 3 ) ,公式中 t0为药物在 没加入脂质体的缓冲液中的迁移时间 。
LCE具有制备简便 、溶剂消耗少 、进样量小 、成
本低等优点 。近年来 , LCE得到了较快发展 。目前
的 6种药物的 logP值来看 ,准确度较高 ,为药物脂水分配系数的测定提供了一种新的方法 。
关键词 :脂质体 ;毛细管电泳 ;脂水分配系数 。
中图分类号 : R917
文献标识码 : A
文章编号 : 0254 - 1793 (2010) 03 - 0447 - 05
A novel mea surement of electrok inetic chroma tography of liposom e by lip id - wa ter partition coeff ic ien ts of pharmaceutica ls3