20
RhD定型及其常见问题
1.Rh定型
RhD定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶卡
2.RhD阴性确认 IgM抗-D阴性
三个厂家IgG抗-D进行 确认 3/10/2021
抗人球蛋白法进行确认 三种IgG抗-D试剂均为阴性，报RhD阴性
一种或一种以上IgG抗-D试剂为阳性，报弱D
红细胞血型和相关检测 21
主要内容
ABO血型鉴定 RhD血型鉴定 交叉配血试验 红细胞抗体筛查及鉴定 血型鉴定和交叉配血自动分析 吸收放散试验
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 1
教学目标
• 掌握ABO和Rh血型鉴定、交叉配血试验原理、方 法和质量控制
• 熟悉红细胞不规则抗体筛查及鉴定方法 • 了解吸收放散试验
3/10/2021
红细胞血型和相关检测
23
（一）盐水介质交叉配血试验
• 本质凝集反应，直接凝集试验 • 检测IgM类抗体 • 方法：试管法 • ABO同型配血，主侧和次侧均无凝集及溶血，表示
无输血禁忌，可以输血
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 24
盐水介质配血方法
患
者
阳
主
性
侧 离心
次 看结果
献
侧
阴
血
性
者
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 8
结果判定
3/10/2021
红细胞血型和相关检测
9
凝胶技术的原理
内套 管壁
试剂或 盐水 凝胶或 玻璃珠
3/10/2021
反应 室
反应 室底 孔
外管壁
特殊粘液
亲和凝 胶
红细胞血型和相关检测 10
凝胶技术的原理：
A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中 不会流入下方微柱中。
红细胞血型和相关检测 25
（二） 抗球蛋白介质交叉配血试验
抗人球蛋白试验：又称Coombs试验，是一种检 查不完全抗体的敏感方法
分类：直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 26
抗球蛋白试验原理
• Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接 与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞 凝集。
红细胞血型和相关检测
15
（四）质量保证
微柱凝胶血型定型检测卡
血清标本应完全取出纤维蛋白，血浆标本建议 EDTA-K2或枸橼酸盐康宁
先加红细胞悬液，再加血浆或抗体试剂
红细胞悬液和血浆各加50ul
按照说明书操作
3/10/2021
红细胞血型和相关检测
16灵敏，结果准确，反应时间短， 结果不能保存，人为因素大 玻片法：操作简单、无需特殊仪器，适用于血型普查；灵敏度差 ，反应时间长，不能用于反定型，结果不能保存，人为因素影响大 ，易发生血液污染 微柱凝胶血型定型检测卡法：特异性强、灵敏度高，结果准确， 保持时间长，标本和试剂用量少，操作可以标准化、自动化，减少 了医源性污染，但需要专门离心设备和试剂卡，成本较高
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 19
ABO正反定型不一致的原因
技术和 操作 错加试剂或标本
试剂失效或污染
受血者 红细胞 或血清
细胞与血清间 比例不适当
溶血现象未能识 别
漏加试剂
结果记录或判断错
3/10/20误21
红细胞血型和相关检测
血清异常 红细胞致敏 近期输血 疾病导致抗原 减弱 抗体减弱 不规则抗体 年龄 近期进行大量 血浆置换治疗
B、试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越 该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层 液体中的试剂反应。
C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂 或盐水层”相同。
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 11
原理：凝胶分子筛和亲和效应
微柱凝胶柱中填充凝胶（葡聚糖），及相应试 剂（抗体或抗原）。凝胶分子间的间隙只允许游 离红细胞通过，分子排阻层析原则将发生凝集反 应的红细胞阻滞于凝胶之内，而未凝集的游离红 细胞则穿过微孔运动到管底，从而判定有无凝集 反应。
红细胞血型和相关检测 2
一、ABO血型鉴定
• （一）盐水介质试管法
• （二）盐水介质玻片法
• （三）微柱凝胶血型定型检测卡法
• （四）质量保证：试管法、玻片法、卡式
• （五）方法学评价
• （六）临床应用
• （七）不一致原因及解决方法
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 3
ABO血型鉴定原理
正向定型：已知的特异性抗体（标准血清）检查红细胞的未知抗原
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 12
结果判定
3/10/2021
新乡红医细学胞院血第型三和临相床关检检验测教研室
13
微孔板法
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 14
（四）质量保证
试管法 标记 加样量、加样顺序 溶血是一种阳性反应 玻片法 标记 正定型 显微镜阴性确认
3/10/2021
3/10/2021
红细胞血型和相关检测
17
ABO正反定型的临床意义
输血治疗的首要步骤 组织器官移植 新生儿溶血病
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 18
ABO正反定型不符分析基本程序
首先重复试验 重新采集献血者与受血者血液标本 查询受血者既往病史及输血史和用药史等 多次洗涤标本红细胞 应用抗-AB、抗-A1、抗-H检测红细胞
• 直接试验：是检查被检红细胞上有无不完全抗 体
三、交叉配血试验
概念：检测受血者和供血者血液中是否含有不相 配合的成分，是输血前确保受血者输血安全必不 可少的试验
包括：主侧配血和次侧配血 主侧是受血者血清与供血者红细胞相配的一侧 次侧是受血者红细胞与供血者血清相配的一侧。
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 22
交叉配血的主次侧
3/10/2021
A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞
-
+
-
+
-
-
-
-
-
+
+
-
结果判断
A B AB O
3/10/2021 2021/3/10
红细胞血型和相关检测
5 5
试管法
3/10/2021
红细胞血型和相关检测 6
红细胞凝集强度判断标准
3/10/2021
试管法结果判定
红细胞血型和相关检测
7
瓷板法
3/10/2021
A抗原 B抗原 A和B抗原 无A和B抗原
反向定型：已知的血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体
3/10/2021 2021/3/10
红细胞血型和相关检测
抗A抗体 抗B抗体 抗A、抗B抗体 无抗A、抗B抗体
4 4
ABO血型鉴定结果判断
正向定型 （标准血清+被检者红细胞）
抗A 抗B
+
-
-
+
+
+
-
-
反向定型 （标准红细胞+被检者血清）