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微磁颗粒分离技术
• 用于分离结合与未结合的反应物
磁场
未结合的AE
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检测原理的反应模式
• 夹心法
•竞争法
• 标记抗原检测方法 • 标记抗体检测方法
• 抗体捕获模式
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夹心法 – 步骤 1
AE-标记抗体加入样品中，与样品抗原结合
哎啶酯 (AE) 抗体
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浅谈肿瘤标志物
2016年5月19日
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肿瘤标志物（tumor markers，TM)
• 肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖的过程中，由肿瘤细胞合成、 释放或者是机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质，这些物质在 血液、体液及组织中可检测到，达到一定的水平时能提示某些肿 瘤的存在。
肿瘤标志物高与查到癌细胞是两回事，也不一定 是代表患有肿瘤！
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ADVIA Centaur XP 全自动化学发光分析系统检测原理
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经典直接化学发光方法
• 吖啶酯(AE)为放光剂 • 采用微磁颗粒分离 • 两种结合模式：
• 竞争法 • 夹心法
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免疫测定
• 抗体 • 抗原 • 示踪/发光剂：吖啶酯 • 分离方法：微磁颗粒分离 • 检测装置
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除了恶性肿瘤，引起肿瘤标记物升 高的其他因素包括：
• 良性疾病，如炎症性疾病：肝脏良性疾病时，AFP、CA19-9、CEA会升高； 肾功能衰竭时β2-微球蛋白及CA15-3、CA19-9、CEA和PSA会升高；风湿病 时CA19-9浓度可增高；
• 生理变化：妊娠时AFP、CA125、HCG会升高；
光释放 (RLUs)
1
2
时间 (妙)
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哎啶酯直接化学发光法的优点
• 无需额外的信号放大或底物 • 光的释放快速 • 对温度和pH值的影响不敏感 • 背景干扰最小
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微磁颗粒分离技术
• 氧化铁颗粒被吸引至磁场区 • 与抗原或抗体发生共价结合
微磁颗粒(PMP)
抗体
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夹心法 – 步骤 4
加入酸碱试剂启动化学发光反应－计算浓度
光释放 (RLUs)
样品浓度
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采用标记抗原的竞争法 – 步骤 1
AE-标记抗原与样品抗原竞争结合与PMP 共价结合的有限的抗体结合位点
微磁颗粒(PMP)
抗体
样品抗原 AE- 标记抗原
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采用标记抗原的竞争法 – 步骤 2
• 指标轻度升高，不要轻下结论，持续观察肿瘤标志物的动 态变化，如进行性升高，患恶性肿瘤的概率比较高；
• 中重度升高或多项指标持续升高，提示肿瘤发生的可能性 很高，必须尽快做医学影像学和细胞病理学等检查；
• 不同医院检验科仪器、试剂各不相同，参考值不一定一样，
因此，不能随意比较不同医PPT学院习交测流 量值的高低。
影像检查、内镜检查或手术探查等综合判断，而病理诊断是肿瘤 诊断的“金标准”
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肿瘤标记物筛查结果判读
• 肿瘤标记物检查阴性： • 患相关恶性肿瘤的概率相对较低； • 如有家族史、癌前病变或有症状，仍需定期复查,结合其他
检查；
• 肿瘤标记物检查阳性：
• 检测可能有假阳性或患良性疾病；
• 优先考虑复检,复检仍阳性者进一步检查；
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抗原抗体特意专一结合是检测的基础
结合位点 抗原
抗体
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发光剂是检测的技术核心
结合位点
AE
抗体
抗原
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吖啶酯简介
• 提升扩散速率 • 最大程度避免结合位点的遮蔽 • 提高分析灵敏度
碱性磷酸酶
哎啶酯
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吖啶酯简介
• 一秒钟高强度的光释放使报告结果更快
样品中的分析 物特异性抗原
其它颗粒
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夹心法 – 步骤 2
加入与特异性抗体结合的微磁颗粒PMP，孵 育，结合抗原的PMP再与AE-标记抗体结合
PMP-抗体-抗原-抗体AE 复合物
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夹心法 – 步骤 3
将未结合的AE分离并去除
Magnet
PMP-抗体-抗原-抗体AE 复合物
比色杯
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二、肿瘤标记物还能用于以下方面 • 出现肿瘤症状或可疑肿物后的鉴别诊断 • 肿瘤生物特点和疾病阶段的判断 • 肿瘤治疗后的疗效观察和判断预后 • 提示肿瘤的复发、转移
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肿瘤指标升高是不是肯定就有肿瘤了？
• 答案是不一定。 • 肿瘤标志物不仅存在于恶性肿瘤中，也存在于良性肿瘤、胚胎组
织、甚至正常组织中； • 肿瘤的诊断不能单独依靠肿瘤标志物的检查，需要由临床检查、
其所提示可能有肿瘤发生的脏器： • CA19-9 胰腺、胃肠道和肝胆 • CA15-3 乳腺、肺、卵巢、肝 • CA242 结直肠、胰腺、卵巢 • CA72-4 胃、卵巢、胰腺、乳腺 • CA125 卵巢、子宫、胰腺、肝、肺 • CA50 胰腺、乳腺、肺、胃肠道和肝胆
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常见肿瘤的标志物检测
• 不良习惯：吸烟、酗酒；
• 检查引起：屡次进行直肠指检后，PSA值可升高；
• 服用某些药物；
• 饲养宠物；
• 此外，抽血过程中的污染、抽血引起的红细胞破裂、标本保存不当、试剂差 异及检测欠规范等因素也会干扰检查结果。
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肿瘤标志物升高了，可不可以明确是哪个部位 的肿瘤？
• 有时可以，但多数不能单凭借肿瘤标记物来明确，还需要结合其他检查。 • 一种肿瘤标记物往往与多种恶性肿瘤有关，以下是一些常见的肿瘤标记物及
孵育后将反应混合物置于磁场下，分离并除去 未结合的AE
磁场
PMP- 抗体- 抗原 复合物
PMP- 抗体- 抗原 –AE 复合物
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采用标记抗原的竞争法 – 步骤 3
加入酸碱启动化学发光反应－计算浓度
光释放 (RLUs)
样品浓度
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采用标记抗体的竞争法 – 步骤 1
结合抗原的PMP与样品抗原竞争AE-标记抗 体上有限的抗原结合位点
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血清肿瘤标志物分类
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一、为什么要查肿瘤标记物？ • 我们知道，早期诊断是治愈肿瘤的关键；而有些肿瘤标记
物的升高往往早于临床症状的出现，因此肿瘤标记物有助 于早期发现肿瘤迹象，早诊断、早治疗，从而提高疗效。 • 比如，我们国家70年代以后在上海等地，通过对大量人群 的甲胎蛋白普查，曾检出不少肝癌特别是小肝癌患者，使 很多病人得到了及时手术切除的机会。