细菌室SOP文件—显微镜检查法
显微镜检查是细菌鉴定工作中的一重要手段，有助于细菌的初步鉴别，同时对下一步鉴定工作起着重要的指导作用。

有时通过形态学检查可得到初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟菌等。

显微镜检查有不染色标本检查法和染色标本检查法两种。

1. 不染色标本的检查：不染色标本主要用于检查细菌的动力及运动状况。

1.1压滴法：用接种环取细菌悬液2环，置于清洁载玻片中央，覆上盖玻片，于高倍镜下观察。

制片时菌液要适量，不可有气泡，不可外溢。

1.2 悬滴法：取洁净的凹窝载玻片及盖玻片各1块，将凹孔四周的平面上涂上一层凡士林，取一环菌液置盖玻片中央，将凹窝载玻片的凹面向下，对准于盖玻片的液滴上，然后迅速翻转玻片，用小镊子轻压盖玻片使之与凹孔边缘粘紧。

镜下观察时先低倍后高倍，不可压碎盖玻片。

有动力的细菌可见细菌从一处移到另一处，无动力的细菌呈布朗运动而无位置的改变。

螺旋体由于菌体纤细、透明，需用暗视野显微镜观察其形态、活动。

2. 染色标本检查法：通过对标本的制片及染色，能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性以及荚膜、芽胞、异染颗粒等结构，有助于细菌的初步鉴定。

2.1快速革兰染色法
2.1.1操作见试剂说明书
2.1.2结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

2.1.3 注意事项：染色关健在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度，菌龄为18～24小时为佳。

2.2抗酸染色法
2.2.1操作见试剂说明书
2.2.2结果：抗酸杆菌呈红色。

2.2.3注意事项：每一张玻片只能涂一份标本且不能在染色缸中染色，以免造成不同标本间的交互污染从而导致阴阳性结果混淆，脱色时间宁长勿短，至无红色液体流下为止。

2.3阿尔培异染颗粒染色法：
2.3.1初染：涂片上滴加第一液染剂（甲苯胺蓝和孔雀绿的乙醇溶液），染3-5分钟，水洗。

2.3.2复染：第二液染剂（碘化钾溶液）染1分钟，水洗。

自然干燥后镜检。

2.3.3结果：菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。

2.3.4注意事项：玻片要清洁，染料需新鲜配制，无沉淀物。

注意与标本中的其他杂质相区别。

3.压片镜检，主要观察细菌在组织中的分布。

4.墨汁负染镜检：背景着色而菌体不着色的染色法，用以观察新型隐球菌的宽厚荚膜等。

5.鞭毛染色镜检，观察细菌有否鞭毛、鞭毛的位置、鞭毛的数量，在非发酵菌的鉴定中是一项重要的指标。

6.暗视野镜检：观察一些较微小且有一定结构的微生物，如钩端螺旋体的钩状及螺旋的形态等。

7.制动试验的直接镜检，在标本加入抗血清，观察动力是否被抑制，如霍乱弧菌的制动试验等。

8.荧光镜检，用标有荧光素的物质与检材中的微生物特异结合产生荧光的特点而对微生物作出鉴定。