• 依次用沸甲醇、沸水、 7%酚 /水、 15% 酚 /醇洗 脱，分步收集、检查、合并。 • 大部分苷类可用 7% 酚 / 水洗下，经减压浓缩至 小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较 纯黄酮苷。
4． 离子交换法
• 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮 类化合物，与不被吸附的杂质分离，再 用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 • RSO3-H+ ArOH（黄酮） 无法交换， 故实际上树脂仅起到吸附作用。
硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸 络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮 分离。
通常在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼 酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。
举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子中 分离graveobiodide A及B
OH RO O OH RO O
三、分离
1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离
常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 １）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型 (Perlon)、六次甲基 二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸 附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。
黄酮类化合物的提取分离
一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以 苷的形式存在；
在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在；
根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不 同溶剂提取。
1. 苷元
多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取；
对于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取；
对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、 羟 基 黄 酮 等 ， 用 EtOAc 、 EtOH 、 Me2CO 、 MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。
2． 碱水提酸沉淀法
适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大
②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易 被氧化，加硼砂保护
③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂 质
3． 炭粉吸附法
• 适用于苷类的精制工作。
• 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤 得吸附苷的活性炭粉末。
３．利用酸性强弱，采用pH梯度萃取法
混合物溶于有机溶剂，依次用５％ NaHCO3 、 ５ ％ Na2CO3 、 0.2%NaOH 、 4%NaOH萃取，相应的黄酮类化合物洗脱 顺序： 7,4’ －二羟基 7 或 4’ 羟基 一般 酚羟基５－羟基黄酮
４．根据分子中某些特定官能团进行分离
醋酸铅沉淀法
OCH3 OH
OH
O
R=芹菜糖
OH
O
I（具有邻二酚羟基）
II（无邻二酚羟基）
原料（种子） 石油醚浸泡脱脂 脱脂药料 乙醇提取 提取液 减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物 溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤 棕色沉淀(A) 悬浮乙醇中，通H2S，过滤 滤液 浓缩至小体积， 冰箱放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I) 沉淀(PbS) 滤液 加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤 黄色铅盐沉淀(B) 同铅盐(A)法进行复分解 晶块 溶于少量乙醇中，放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色针晶(graveobioside B) (II)
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。