迄今未能分离出这种高能蛋白质。但在电子传递过程中蛋白 质组分的构象变化还是存在的。
支持化学渗透假说的实验证据：
(1) (2)
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氧化磷酸化作用的进行需要封闭的线粒体内膜存在。 线粒体内膜对H+ OH- K+ Cl-都是不通透的。 破坏H+ 浓度梯度的形成（用解偶联剂或离子载体抑制 剂）必然破坏氧化磷酸化作用的进行。 线粒体的电子传递所形成的电子流能够将H+ 从线粒体 内膜逐出到线粒体膜间隙。 大量直接或间接的实验证明膜表面能够滞留大量质子， 并且在一定条件下质子能够沿膜表面迅速转移。 迄今未能在电子传递过程中分离出一个与ATP形成有 关的高能中间化合物，亦未能分离出电子传递体的高 能存在形式。 H+如何通过电子传递链“泵”出的？
chemical coupling hypothesis
认为电子传递反应释放的能量通过一系列连续的 化学反应形成高能共价中间物，它们随后裂解驱动氧 化磷酸化，即将其能量转移到ADP中形成ATP。
（2）构象偶联假说（1964）
conformational coupling hypothesis
认为电子沿电子传递链传递使线粒体内膜的蛋 白质组分发生了构象变化，形成一种高能构象，这 种高能形式通过ATP的合成而恢复其原来的构象。
离子载体（离子载体抑制剂）


是一类脂溶性物质，能与H+以外的其他一 价阳离子结合，并作为他们的载体使他们 能过穿过膜，消除跨膜的电位梯度。 缬氨霉素（K+） 短杆菌肽（K+ Na+）
解偶联蛋白（产热素）


是存在于某些生物细胞线粒体内膜上的 蛋白质，为天然解偶联剂。 它们能形成质子通道，让膜外的H+通过 通道返回膜内，消除跨膜质子浓度梯度。 如：动物的褐色脂肪组织，其产热机制 是线粒体氧化磷酸化解偶联的结果。
人、新生无毛的脱氢酶（真菌和高等植物）
NADH脱氢酶（复合物Ⅰ）

外NADH脱氢酶

内膜内侧，朝向基质
催化线粒体内部的NADH脱 氢交给其辅基FMN 将氢传递给CoQ
内膜外侧，朝向膜间空间
是一种以FAD为辅基的黄素 蛋白，催化细胞液的NADH 脱氢交给其辅基FAD 将氢传递给CoQ，不经过复 合物Ⅰ，P/O比为2或1.5




葡萄糖彻底氧化的能量计算：

原核生物 真核生物：不同组织 EMP的能量计算也需考虑部位。
F1部分包括9个亚基，3个亚基、 3个亚基及、、亚基个1个。 亚基是催化ATP合成的部位， 亚基连接FO和F1。 FO上有离子 通道和6个二环己基二亚胺 （DCCD，DCC，DCCI）结合蛋白， 这些蛋白围成桶状，具有离子 通道，通道内部有谷氨酸残基 （大肠杆菌是天冬氨酸残基）， 这些残基可与DCCD结合，从而 抑制质子通过FO 。 连接F1部分和FO部分是一个短 柄，包含有两种蛋白质，寡霉 素敏感性付与蛋白（OSCP）和 偶合因子6（F6），寡霉素可与 FO结合，抑制质子通过FO。
第三节 氧化磷酸化
一、概念 二、氧化磷酸化偶联部位及P/O比 三、氧化磷酸化机理 四、氧化磷酸化的解偶联剂和抑制剂 五、线粒体穿梭系统 六、氧化磷酸化的调控
一、概念
生物体内高能磷酸化合物ATP的生成 主要由三种方式： 氧化磷酸化 底物水平磷酸化 光合磷酸化

线粒体的结构
外膜——平滑，含约50%脂类和50%蛋白，蛋白质中有些
可以形成孔道蛋白，能通过分子量小于4000~5000的物质。
内膜——含约20%脂类和80%蛋白。它是细胞质和线粒体基 质之间的主要屏障。内膜有许多向内的折叠，称为嵴。嵴 与嵴之间形成区室。内膜上有许多球状颗粒（内膜球体）， 内膜还含有许多富含蛋白质的跨膜颗粒（如电子传递链颗 粒、跨膜运送颗粒等）。
（1）化学偶联假说（1953年）