1.4
17
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴 中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
1.4
18
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发 的影响不大，但对某些真菌孢子有刺 激或抑制作用，如光照可刺激水稻黑 粉病菌厚垣孢子的萌发，抑制小麦秆 锈病菌夏孢子的萌发。
2.
26
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂的配制 水溶性药剂直接用水溶解，其它药剂 选用合适的有机溶剂（甲醇、丙酮、 二甲基亚砜等）溶解，再用0.1%的吐 温80水溶液稀释，设置5~7个浓度， 有机溶剂最终含量不超过2%
4.
28
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
调查 当空白对照孢子萌发率达到90%以上 时，每重复了随机观察3个以上视野， 调查孢子总数不少于200个，分别记 录萌发数和孢子总数。

4
一、杀菌剂毒力测定方法
1、孢子萌发法
(spore germination method) 快速。广泛用于保护剂的测 定 此法适用于抑制病菌能量合 成系统，而使孢子不能萌发 的杀菌剂。
5
一、杀菌剂毒力测定方法
玻璃器皿的处理 清洁：以洗液浸泡数十分钟,用自来水 冲洗, 用蒸馏水清洗,防尘干燥. 载玻片保存于70%的酒精溶液内.
多菌灵对镰刀菌及由镰刀菌引起的赤
霉病、恶苗病的室内毒力测定和田间 药效比较一致。 但多菌灵在室内测定对由镰刀菌引起 的棉花枯萎病效果较好，而田间多菌 灵对棉花枯萎病效果较差。
3
第三章 杀菌剂毒力测定
三环唑（黑色素合成抑制剂）在室内测是 无效的。 嘧啶胺类杀菌剂（嘧菌胺）室内对灰霉病 孢子萌发没有抑制作用（300μL/ ml）， 但在植物上(1μL/ ml)，对灰霉病防效较好。 (该类药剂能抑制病菌甲硫氨酸的生物合成 和细胞壁降解酶的分泌，从而影响病菌侵 入寄主植物．)
2
35
一、杀菌剂毒力测定方法
2
.3结果检查及其表示方法 十字交叉测2个直径，以其平均值代 表菌落大小。
处理菌落直径 菌饼直径 抑制生长率 1 100 % 对照菌落直径 菌饼直径
36
一、杀菌剂毒力测定方法
3
滤纸片附着法(adsorption technique) 此法是将真菌孢子悬浮液用适当方法 附着在灭菌的滤纸片上，使其接触一 系列不同浓度的药剂，放在一定条件 下培养一定时间后，观察菌丝生长情 况。
2
33
一、杀菌剂毒力测定方法
.2 接种病原菌 菌饼接种法：Φ 0.4cm的打孔器打出 菌饼，用接种针或镊子放入含毒培养 基的中央。
2
34
一、杀菌剂毒力测定方法
.2 接种病原菌 划线接种法：用接种针沾取病菌孢子 液在培养基上划一直线进行接种，培 养一段时间后，测量菌丝伸向直线垂 直方向的长度。
1.1
6
一、杀菌剂毒力测定方法
液剂的附着 A、混合滴加 将供试药剂与孢子悬浮液混合滴加于 载玻片上。对水溶性药和稳定的悬浮 剂可得到正确的结果。对于非水溶性 药剂，因沉降快而不易获得正确结果。 简单迅速，适于大规模初筛。测得结 果一般偏高。
1.2
7
一、杀菌剂毒力测定方法
B、定量滴加药膜法
1.5
对照萌发率 处理萌发率 抑制萌发率 100 % 对照萌发率
24
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
试验靶标 易产生孢子,便于镜检,如稻瘟病菌,梨 黑星病菌等.在培养基上培养,或将病 组织保湿培养,待产生孢子后备用。
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子浓度可用计数器测定
纽鲍尔（Neubauer）血球计数器。
边长为0.05mm的小方格，深度为
0.1mm
16
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 A、温度：各种真菌孢子萌发的最适 温度不同。适于低温的孢子，如小麦 黑穗病菌的厚垣孢子，温度超过 21~22℃ 就不能萌发。
一、杀菌剂毒力测定方法
4
扩散法：农用抗菌素效价测定 B、重量单位，将纯净的抗菌素直接 作为抗菌素效能的衡量单位，即1µg 相当于于1个单位。例如，纯净的1mg 链霉素含有1000个单位。
43
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法： 滤纸片法：药剂加于一定大小的 圆形滤纸片上。 孔碟法：在培养基上打孔或留孔， 药液加于此孔内。 滴下法：利用注射器、毛细管、 移液管等将药液直接滴加于培养 基上。
3.
27
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂处理 使药液与孢子悬浮液在小试管中等量 混合均匀。用微量加样器吸取上述混 合液滴到凹玻片上，然后架放于带有 浅层水的培养皿中，加盖保湿培养。 每处理不少于3次重复。
定量滴加药液（用水或有机溶剂均
可），形成均匀的药膜，再滴加孢子 液。 许多有机溶剂（丙酮、乙醚）表面张 力小，不易形成均匀的药膜，因此， 应采用凹玻片。防尘条件下干燥。
8
一、杀菌剂毒力测定方法
C、装置喷雾
利用精确喷雾装置将药液喷于载玻片
上，干燥后滴加孢子悬浮液。
9
一、杀菌剂毒力测定方法
1.4
21
一、杀菌剂毒力测定方法
有些病菌在蒸馏水中萌发不好，可加
入某些促进物质。许多病菌孢子，按 10毫升孢子液加入0.1%葡萄糖溶液 0.01毫升，可使孢子萌发整齐。 玉米小斑病菌孢子，适当加入一点玉 米苗的新鲜汁液，在26℃下2h，孢子 萌发率高，整齐。
22
一、杀菌剂毒力测定方法
调查方法 一般病菌培养20~24小时即可镜检。 一般在100~200倍下镜检，每处理随 机检查200个孢子。 孢子萌发标准：芽管大于孢子短半径 即算萌发。 或以孢子囊产生游动孢子为萌发标准， 如马铃薯晚疫病菌。
1.5
23
一、杀菌剂毒力测定方法
调查方法 对照萌发率至少大于80%，低于80% 应重做。
13
一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
D、病菌培养条件
高温、低温或高低温交替有时可促进
孢子的产生。一般半知菌在有光照的 条件下易产生孢子。但有的病菌在无 光下易产生孢子。
14
一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
配制：一般将已培养好的菌种（斜面
15
或三角瓶培养）加入无菌水，用接种 环在表面轻轻摩擦，使孢子悬浮于水 中，然后用双层纱布过滤，除去菌丝 体和培养基碎块。最好在1000r/min 的离心机上用无菌水洗涤三次。 一般规定孢子的浓度最好是5万/ml。 10*10观察时，每个视野约有35个。
1.
25
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
孢子悬浮液配制 将培养好的病原真菌孢子用去离子水 从培养基或病组织上洗脱、过滤、离 心（1000r/min）5min，倒去上清液， 加入去离子水，再离心。最后用去离 子水将孢子重悬浮至每毫升105~107 个孢子，并加入0.5%葡萄糖溶液。
2
31
一、杀菌剂毒力测定方法
生长速率法 病菌易培养，菌丝生长快，不易产生 孢子。 棉花炭疽、红麻炭疽、小麦赤霉等病 菌具有生长快速、整齐、平伏的特点， 有利于此法测定。
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
.1 含毒培养基的制备 一般以1ml药液加入 9ml培养为宜,这 样的比例不会影响培养基凝固. 对挥发性强、受热易分解的药剂应注 意培养基的温度，最好当培养基冷却 到50℃左右时再加入药剂。

40
一、杀菌剂毒力测定方法
4
扩散法 管碟法： 在试验平面上放4个牛津杯（外径8mm， 内径6mm，高10mm）。用移液管将已 知浓度的标准液和不同浓度的待测液 移圆筒内，在适温下培养，让其形成 抑菌圈。测其直径。
41
一、杀菌剂毒力测定方法
4
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扩散法：农用抗菌素效价测定 抗菌素效价的衡量单位分两类： A、稀释单位，将1mg抗菌素配成溶液， 在一定条件下进行稀释，对某一细菌 能抑制其生长的最高稀释度，即为1mg 抗菌素所含的单位。如1mg青霉素，在 一定条件下稀释3600倍能抑制白色念 球菌的繁殖，则1mg青霉素含有3600单 位。
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一、杀菌剂毒力测定方法
3
滤纸片附着法 定性滤纸灭菌（130℃，1h），7080%的酒精20-30分钟， 滴加孢子悬 浮液，无菌干燥，浸入药液中10分钟， 放入培养基上培养。
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一、杀菌剂毒力测定方法
4
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扩散法（抑菌圈法,detection of inhibition zone） 基本原理是在已接种的琼脂培养基上 加少量的抗菌物质，使其接触培养基 和病原菌，经一定时间的培养后，接 触部分的周围由于抗菌物质的扩散而 产生抑菌圈。 扩散法广泛用于医用和农用抗菌物质 的筛选和抗菌性物质有效成分的定量
1.4
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一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 D：空气：孢子萌发多需要空气，所 以水滴表面的孢子比沉在水滴中的萌 发好。但玉米黑粉病菌孢子萌发需要 15%的CO2。