中国　织工程研究与临床康复　７４　箬３２够２０１０—０８—０６出版　ＪｏｕｍａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｖｅ　ＴｉｓｓｕｅＥｎｇｍｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ　Ａｕｇｕｓｔ　６’２０１０　ＶｏＬ１４，Ｎｏ．３２　肺癌细胞系中肿瘤干细胞的分离鉴定与功能分析冰☆　灵婕，刘晶，王秀冬，朱凌云，吴祖泽，于爱平　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｗｕ　Ｊｉｅ，Ｌｉｕ　Ｊｉｎｇ，Ｗａｎｇ　Ｘｉｕ－ｄｏｎｇ，Ｚｈｕ　Ｌｉｎｇ—ｙｕｎ，Ｗｕ　Ｚｕ—ｚｅ，Ｙｕ　Ａｉ—ｐｉｎｇ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｃ：ｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　１　００８５０．Ｃｈｉｎａ　ｗｕ　Ｊｉｅ　｜　Ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｆｏｒ　ｄｏｃｔｏｒａｔｅ．Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｃａｄｅｍｙ　０ｆ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ．Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００８５０．Ｃｈｉｎａ　ｇｒｅｅｎｆｏｒｅｓｔｗｊ＠ｓｉｎａ．　ｃｏｍ　ＣＯｒｒｅｓＤＯｎｄｅｎｃｅ　ｔｏ：　Ｗｕ　Ｚｕ－ｚｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　ｌｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　１　００８５０．Ｃｈｉｎａ　ｗｕｃｔ国ｎｉｃ　ｂｍｉ　ａｃ　ｃｎ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｔｏ：　ＹｕＡｉ—ｐｉｎｇ．　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ．Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００８５０，Ｃｈｉｎａ　ｓｘｙａｐ７０２０＠ｙａｈｏｏ　Ｃ０ｍ　ｃｎ　Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ：ｔｈｅ　ＮａｔｉｏｎａＩ　ＮａｔｕｒａＩ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏ　３０７７０８３３；　Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０１０４）３－１７　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０１０－０４－２１　

５９８８　ＢＡＣＫＧＲ０ＵＮＤ：Ｉｔ　ｉｓ　ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ　ｔｏ　ｍａｉｎｔａｉｎ　ｔｈｅ“ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ”ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒＯｍ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｔｈａｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｋｅｐｔ　ｆｏｒ　ａ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ　ｉｓ　ａ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｍｅａｎｓ．　０ＢＪＥＣＴｌＶＥ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｗｈｅｔｈｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｉｓｔ　ｏｒ　ｎｏｔ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌＩ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｉｔｈ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ　ａｎｄ　ｄｉ仟ｅｒｅｎｔ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｔｈｅｒｅｏｆ．　ＭＥＴＨｏＤＳ：Ｔｈｅ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ａｓｓａｙｓ　ｏｎ　ｒａｔ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｏｒ　ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｓｓｅｓｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａＩ　ｏｆ　ＰＬＡ一８０１　Ｄ　ａｎｄ　ＰＬＡ一８０１　Ｃ．Ｔｈｅ　ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｃｅｌＩ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗａｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄＩｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｐｏｔｅｎｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｅｌＩ　ｃｏｌｏｎｓ　ａｎｄ　ｓｕｂｃｌｏｎｅｓ．Ｔｈｅ　ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｃａＩ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｃｅｌＩ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｇｅｌ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｓｓａｙｓ．　ＲＥＳＵＬＩＴＳ　ＡＮＤ　ＣＯＮＣＬＵＳＩｏＮ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＰＬＡ－８０１Ｃ　ｃｅｌｌｓ，ＰＬＡ一８０１Ｄ　ｃｅｌｌｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｏｎ　ｂｏｔｈ　ｒａｔ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ａｎｄ　ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｐ＜０．０１）．ＰＬＡ－８０１　Ｄ　ｃｅｌｌｓ　ｃｏｕｌｄ　ｆｏｒｍ　ｆ０ｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｅｌＩ　ｃｌｏｎｅｓ，ａｎｄ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｃｏｕｌｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｊｎｔｏ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｆｏｕｒ　ｃｌｏｎｅｓ　ｊｎ　ｓｕｂｄｏｎｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ．ｏｎｌｙ　ｔｈｒｅｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｃｌｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｊｎ　ＰＬＡ８０１　Ｃ　ｃｅｌｌｓ．ａｎｄ　ｎｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｃｏｕｌｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａＩ　ｔｈｒｅｅ　ｃｌｏｎｅｓ　Ｉｎ　ｔｈｅｉｒ　ｓｕｂｃｌｏｎｅｓ．ＰＬＡ　８０１　Ｄ　ｃｅｌｌｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｂｅｔｔｅｒ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｇｅＩ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｈａｎ　ＰＬＡ－８０１　Ｃ　ｃｅｌｌｓ　ｆＰ＜０．ｏ５）．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈａｔ　ａ　ｇｒｏｕｐｌｅｔ　ｏｆ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ＰＬＡ＿８０１　Ｄ　ｃｅｌｌｓ　ｓｈｏｗ　ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａＩ　ａｎｄ　ｍｕｌｔｉ—ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ。ＰＬＡ－８０１　Ｄ　ｃｅｌｌｓ　ｄｉｓｐｌａｙ　ｇｏｏｄ　ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｃａＩ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　Ｐｏｔｅｎｔｉａ１．ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｉｔｓ　ｇｏｏｄ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｘ．　Ｗｕ　Ｊ，Ｌｉｕ　Ｊ，Ｗａｎｇ　ＸＤ．Ｚｈｕ　ＬＹ，Ｗｕ　ＺＺ，Ｙｕ　ＡＰ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ．２０１　０；１４（３２）：５９８８—５９９１．　【ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ．ｃａ　ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ】　摘要　背景：肿瘤干细胞在体￣Ｅ＇ｔＪ　增和培养过程中如何保持其干细胞的特性成为肿瘤干细胞研究的重要障碍，从可长期稳定保存　的细胞系中分离获得肿瘤干细胞可能成为肿瘤干细胞研究的可靠途径。　目的：探讨遗传背景相似、转移特性不同的肺癌细胞中肿瘤干细胞的存在与否及其功能。　方法：观察ＰＬＡ－８０１Ｄ和ＰＬＡ－８０１Ｃ细胞对鼠尾胶原和纤连蛋白的黏附作用，以考察两株细胞的转移潜能；观察ＰＬＡ．８０１Ｄ　和ＰＬＡ－８０１Ｃ细胞形成单细胞克隆的种类及每种细胞克隆的亚克隆种类和性能，判断两株细胞中是否存在肿瘤于细胞；　采用胶原收缩实验考察两株细胞的生物力学重塑能力，即对细胞外基质的重塑能力。　结果与结论：ＰＬＡ一８０１Ｄ细胞对鼠尾胶原和纤连蛋白的黏附作用均明显强于ＰＬＡ－８０１Ｃ细胞（尸＜０．０１　ｏ　ＰＬＡ－８０１Ｄ可产　生４种单细胞克隆，其中１种在传单细胞亚克隆后仍可形成如上４种克隆，而ＰＬＡ一８０１Ｃ细胞中未发现有完全分化能力　的细胞克隆。ＰＬＡ一８０１Ｄ细胞的生物力学重塑能力Ｉｊ王明显高于ＰＬＡ．８０１Ｃ细胞（Ｐ‘０．０５）。结果证实具有高转移潜能的　ＰＬＡ．８０１Ｄ细胞中含有一小群具有自我更新和分化能力的肿瘤干细胞，且该细胞株的生物力学熏塑性较好，提示该细胞株　对细胞外基质的重塑性能较强。　关键词：肿瘤干细胞；肿瘤细胞系：单细胞克隆；转移潜能：生物力学重塑　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３．８２２５．２０１０．３２．Ｏ２１　吴婕，刘晶，王秀冬，朱凌云，吴祖泽，于爱平　市癌细胞系中肿增干细胞的分离鉴定与功能分折［Ｊ】．中国组织工程研究　ｊ　临床康复，２０１０，１４（３２）：５９８８・５９９１．　【ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ　ｈｔｔｐ：／／ｃｎ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ】　０　引言　研究表明，大部分的肿瘤细胞群存在异　质性，主要表现在其扩增能力、抵抗凋亡能　力、以及在异种移植后重新形成肿瘤的能力　等方面。许多证据表明在肿瘤组织中有一小　群细胞拥有多向分化和自我更新能力，该类　细胞被称为肿瘤干细胞【１Ｊ。首次报道的肿瘤干　细胞是在血液肿瘤中发现６勺Ｉ　。后来陆续在许　多实体瘤中也发现了肿瘤干细胞的存在　Ｊ。随　后的研究发现，原被认为具有遗传和表观均一　性的肿瘤细胞系也存在着细胞异质性，许多肿　瘤细胞系中也发现了肿瘤干细胞Ｉ　引，这群干细　胞在培养基中保存若干年仍可持续稳定地存　在　。训。目前许多研究认为肿瘤干细胞的存在是　肿瘤化疗、放疗后复发的主要原因，ｌ！＝ｌ足肿瘤　转移的主要始作俑者，尽管其具体机制并未被　完全阐明，但许多研究人员仍然认为肿瘤的成　功治疗将依赖于肿瘤干细胞的清除【］。。　Ｊ。但日　｜ＳＳＮ　１６７３．８２２５　ＣＮ　２１．１５３９，Ｒ　

ｃｏＤＥＮ：ＺＬＫＨＡＨ　是婕．等　秭癌缎魄系中罨孛瘸子镪匏的分离鉴定与功能分辑　＠　～一　ｒｇ　前限制肿瘤干细胞研究的一个不可忽视的技术　问题是从临床肿瘤组织获得的肿瘤干细胞的体　外培养问题，即如何保持其在传代过程中不分　化从而满足后续的实验研究需要。从已有的细　胞系中鉴定、分离肿瘤干细胞成为解决这一问　题的可靠途径，可以由此持续地得到肿瘤干细　胞以供研究之用。考虑肿瘤复发和转移与肿瘤　干细胞密切相关，推测在不同转移特性的细胞　系或细胞株中，肿瘤干细胞的存在或数量可能　存在差别。基于以上考虑，本实验旨在对比两　株遗传背景相似、转移特性不同的肺癌细胞株　中肿瘤干细胞的存在情况，以及相应的与肿瘤　转移和复发相关的性能研究，以期为在肿瘤细　胞系中研究肿瘤干细胞提供支持。　１材料和方法　设计：对比观察实验。　时间及地点：于２００８．０９／２００９　０４在解放　军军事医学科学院放射与辐射医学研究所实　验血液学实验室完成。　材料：肺癌细胞ＰＬＡ．８０１Ｄ和ＰＬＡ．８０１Ｃ　由解放军军事医学科学院基础医学研究所陆　应麟教授馈赠。两株细胞是从ＰＬＡ．８０１细胞系　中经有限稀释法分离出来的单克隆细胞株。５　只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠购自解放军军事医学科学院　实验动物中心，体质量２２０￣２６０　ｇ。实验过程　中对动物的处置符合动物伦理学标准。　实验方法：　鼠尾胶原的制备：取Ｗｉｓｔａｒ大鼠尾巴于体积　分数７５％乙醇浸泡３０　ｒａｉｎ，然后将尾巴剪开、　去掉皮毛，并剪成３　ｃｍ左右的小段，抽出银色　的尾键簧于平叭中，剪碎尾键。把剪碎的尾键　置于１５Ｏ　ｍＬ　０．１％的醋酸中，４℃振荡放置　４８　ｈ后取上清４　０００　ｒ／ｍｉｎ离　０３０　ｍｉｎ后，取上　清，即为鼠尾胶原。Ｌｏｗｅｒｙ法测定鼠尾胶原浓　度。分装鼠尾胶原４℃保存备用。　细胞黏附试验：取纤连蛋白和自制的鼠尾胶　原分别包被９６孔板，６０　ＩＪＬ／￣Ｌ，４℃包被过夜。　吸出包被液，ＰＢＳ洗２次，加入３％ＢＳＡ于３７℃　封闭１　ｈ。ＰＬＡ一８０１　Ｄ４￣ＰＬＡ－８０１Ｃ细胞用胰酶消　化制成细胞悬液，加入含体积分数１０％新生牛　血清的培养基调整细胞浓度为５ｘｌ０８Ｌ’。。取出　９６孔板，弃封闭液，ＰＢＳ洗２次，各？Ｌ）ＪＨ入细胞　悬液１００　ｐＬ，￣ＩＪ５ｘ１０４／？Ｌ。３７℃放置１　ｈ，吸　出培养基，ＰＢＳ洗２次，４０　ｇ／Ｌ多聚甲醛固定２　ｈ，　Ｏ。１　ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ８．５的硼酸盐缓冲液洗２次，各孔　ＩＳＳＮ　１　６７３—８２２５　ｃＮ　２１—１　５３９７Ｒ　ｃｏＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ　加入１％亚甲基蓝室温染色１０　ｍｉｎ，硼酸盐缓　冲液洗４次，加入０．１　ｍｏｌ／Ｌ的盐酸３７℃放置　４０　ｍｉｎ，６００　ｎｍｉ贝０Ａ值。　单细胞克隆及亚克隆：用胰酶消化　ＰＬＡ．８０１Ｄ和ＰＬＡ．８０１Ｃ细胞，制成单细胞悬　液，约１　Ｘ１０　培养基，单细胞悬液以１００　ｐＬ／－ｆＬ接种于９６；ｆＬ板，每种细胞共接种４块９６　孔板。接种完Ｌ丰后显微镜下观察每孔接种单细　胞的成功率。接种后２周，显微镜观察单克隆　形成及其形态分类。观察结束后将每个单细胞　克隆再传细胞亚克隆。方法同前，观察每种克　隆继续形成单细胞克隆的类型和数量。　生物力学重塑：为考察ＰＬＡ．８０１　Ｄ和　ＰＬＡ－８０１Ｃ细胞对细胞外基质重　能力的影　响，进行胶原收缩实验［１３＿’　。具体方法如下：　取细胞浓度为１×１０　的细胞悬液２５０　ｐＬ）ＪＩ］　入￣Ｊ２５０　ｐＬ自制的鼠尾胶原中，混匀后小心地　滴加到含３　ｍＬ培养基的培养板（３５　ｍｍ）中。室　温放置１　ｈ，使胶原多聚化，然后放入细胞培养　箱，培养观察两三周，测量胶原的直径以确定　细胞的生物力学重塑能力。以ＥＣＶ３０４细胞为　阳性对照。　设计、实施、评估者：实验由两位通讯作　者设计，第一、二、　、四作者具体实施。　２结果　２．１　ＰＬＡ－８０１Ｄ和ＰＬＡ－８０１Ｃ细胞的黏附能力　如图１所示，ＰＬＡ一８０１Ｄ细胞对鼠尾胶原和纤连　蛋白的黏附能力均明显高于ＰＬＡ一８０１Ｃ细胞　（Ｐ＜０．０１）。　Ｒａｔ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｇｅｌ　Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ　。Ｐ＜０．０１．ｖｓ　ＰＬＡ，８０１　Ｄ　Ｆｉｇｕｒｅ　１　Ａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏｐｅｒｔｙ　ｏｆ　ＰＬＡ一８０１　Ｃ　ａｎｄ　ＰＬＡ一８０１　Ｄ　ｃｅｌｌｓ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｘ　图１　ＰＬＡ一８０１Ｃ和ＰＬＡ．８０１Ｄ细胞刈细胞外毓质　的黏跗　２．２　ＰＬＡ．８０１　Ｄ和ＰＬＡ．８０１　Ｃ单细胞克隆及亚　克隆　ＰＬＡ一８Ｏ１　Ｃ单细胞恳液接种的４块９６－ｆＬ　板中，共有３３９个孔成功接种了单细胞，克隆　形成率为８１．３１％，共形成３种克隆，其中Ｉ型　解放军军事医学　科学院放射与辐　射医学研究所，北　京市１００８５０　昊婕☆，女，１９７７　年生，江苏省连云　港市人，汉族，解　放军军事医学科　学院在读博士，主　要从事肿瘤病理　生理学研究。　ｇｒｅｅｎｆｏｒｅｓｔｗｊ＠　ｓｉｎａ．∞ｍ　通讯作者：昊祖　泽，解放军军事医　学科学院放射与　辐射医学研究所　实验血液学实验　室，　北京市　１００８５０　ｗｕｃｔ＠ｎｉｃ．ｂｍｉ．ａｃ．　ｏｎ　通讯作者：于爱　平，军事医学科学　院放射与辐射医　学研究所实验血　液学实验室，北京　市１００８５０　ｓｘｙａｐ７０２０＠　ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ　中留分类号：Ｒ３９４　２　文献标识码　Ｂ　文章编号：１６７３—８２２５　（２０１ｏ）３２—０５９８８－０４　收稿日期：２０１０－Ｄ３－仃　修回日期：２０１０－０４－２１　（２０１００３１７０１０／ＧＷ　Ｏ１　

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