课件之家精心整理资料--欢迎你的欣赏 镉对小鼠肝脏毒性作用探讨 摘要：目的 了解镉对小鼠肝脏的毒性作用，并探讨其对肝脏组织的毒作用机理。方法 健康成年清洁级昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，临用前以生理盐水配制CdCl2溶液，CdCl2染毒剂量分别为0.05、0.1、0.2mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mg/kg体重），对照组注射生理盐水（10mg/kg体重），连续染毒三天，处死，取肝称重并制备肝匀浆，测量其肝脏系数、匀浆蛋白浓度、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）和超氧化物歧化酶活性（SOD）及肝脏过氧化脂质讲解产物丙二醛（MAD）的活性。结果 染毒组小鼠上述各指标与对照组相比均有差异，但无统计学意义。结论 尚不能论证镉对肝脏组织有损伤作用。 关键词：镉；肝脏；毒性作用；小鼠 引言：镉在环境中广泛持久存在,对人和动物造成极大的健康危害。急性镉暴露可损害机体多种靶器官组织。肝脏是镉急性中毒损伤的主要靶器官之一。鼠急性中毒后，镉主要蓄积于肝脏。镉有很强的亲硫性。在肝脏中，镉易与巯基结合而诱导金属硫蛋白生成镉-硫蛋白，因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用，但若镉在短期内大量转运到肝脏，便导致肝内金属硫蛋白相对不足，不能与镉有效结合而引起肝功能障碍，这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一【1】。通过本次实验了解镉对小鼠肝脏的毒作用，并探讨其对肝脏组织的毒作用机理，从而对镉的毒性损害作用做出评价。 1、材料与方法 1.1实验试剂 氯化镉（CdCl2、AR、中国上海新化工厂生产，GB1285-77，批号890401）、蒸馏水、0.9%生理盐水、蛋白浓度试剂（南京建成）、GOT测试剂盒（南京建成）、GPT测试剂盒（南京建成）、MDA测试剂盒（南京建成）、SOD测试剂盒（南京建成）。 1.2实验仪器 电子天平（感量 0.1g）、SIGMA 2K15型冷冻高速离心机、注射器、剪刀、镊子、滤纸、玻璃匀浆器、冰浴容器、水浴箱、量筒、烧杯、试管、移液管、移液枪、VIS-7220N型分光光度计。 1.3实验动物 健康成年清洁级昆明种小鼠40 只，雌雄各半，体重20～27g，由福建医科大学动物实验中心提供。 1.4实验方法 1.4.1分组与染毒 课件之家精心整理资料--欢迎你的欣赏
将40只小鼠随机分为4组，临用前以生理盐水配制CdCl2溶液，CdCl2染毒剂量分别为0.05、0.1、0.2mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mg/kg体重），对照组注射生理盐水（10mg/kg体重），每天定时称量体重后染毒，连续染毒三天。 1.4.2处死与肝脏提取 第4天分别称量小鼠体重后颈椎脱臼法处死，处死后立即取出肝脏并剥离周围脂肪及结缔组织，用生理盐水洗净后用滤纸吸干，称肝重，记录数据并计算脏器系数。 1.4.3肝匀浆制备 取肝组织0.2g，置于玻璃匀浆器中并加入2ml0.9%生理盐水，在冰水浴下研磨成10%肝匀浆，移至试管中并按小鼠编号分别标号备用。 1.4.4蛋白浓度、ALT、AST、MDA及SOD活性测定 1.4.4.1取上述所制的肝匀浆用3000r/min离心15分钟，取其所得上清液备用0.1ml与0.9ml 0.9%生理盐水混合均匀备用。 1.4.4.2蛋白浓度测定：采用Lorry法；ALT、AST测定：GOT、GPT检测试剂盒，比色法；MDA测定：采用硫代巴比妥酸（TBA）法即MDA检测试剂盒，比色法；SOD测定：SOD检测试剂盒，比色法；脏器系数：称重法。 1.5计算 1.5.1肝匀浆蛋白浓度计算： 蛋白质浓度=（测定管-空白管）/（标准管-空白管）×标准管浓度（0.563g/L） 1.5.2组织匀浆中总SOD活力计算： 定义：每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。 计算公式： 组织匀浆中SOD活力（U/mgprot）=｛（对照管吸光度-测定管吸光度）/对照管吸光度｝÷50%×（反应液总体积/取样量（ml））÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml） ＊mgprot为毫克蛋白数 1.5.3组织中AST、ALT活力计算： 组织中AST、ALT活力（U/mgprot）=通过标准曲线得的匀浆活力÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml） 1.5.4组织中MDA含量计算： 组织中MDA含量（nmol/mgprot）=（测定管OD值-标准空白管OD值）/（标准管OD值-标准空白管OD值）×10(nmol/ml) ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml） 1.5.5肝脏系数的计算： 肝脏系数=[肝脏重量（g）/体重（g）]×100% 课件之家精心整理资料--欢迎你的欣赏
1.6实验数据处理与结论 建立Excel数据库，分别输入各组实验数据，运用SPSS16.0 统计软件,采用方差分析法进行统计处理。
表1 小鼠染毒前后体重差 CdCl2(mg/kg) 生理盐水 合计 0.050 0.100 0.200
1 -0.35 -1.30 -2.60 -2.70 2 -0.70 -2.70 -0.90 -2.60 3 -0.47 -2.00 3.90 -1.30 4 -1.30 -0.50 -0.20 -2.60 5 1.02 3.50 -1.20 0.80 6 2.52 0.60 -0.40 0.70 7 1.60 0.90 0.10 0.70 8 1.50 1.10 -1.50 0.30 9 2.80 4.00 1.50 0.80 10 3.29 1.60 0.10 0.80 排除异常值之后 例数 10 10 9 10 39
平均值 0.991000 0.520000 -0.566667 -0.510000 0.125897 标准差 1.618212 2.203936 1.164045 1.594748 1.765236 方差 2.618610 4.857333 1.355000 2.543222 3.116056 方差分析1
变异来源 SS df MS F P 总变异 118.410 38 组间 17.877 3 5.959 2.075 >0.05 组内 100.533 35 2.872 按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。
表2 四种方案处理后小鼠肝脏系数 CdCl2(mg/kg) 生理盐水 0.050 0.100 0.200
1 0.05 0.05 0.06 0.05 2 0.06 0.07 0.05 0.05 3 0.04 0.05 0.05 0.05 4 0.05 0.05 0.05 0.06 5 0.04 0.04 0.05 0.05 6 0.06 0.05 0.06 0.05 7 0.05 0.04 0.05 0.07 8 0.05 0.05 0.05 0.08 9 0.05 0.05 0.05 0.05 课件之家精心整理资料--欢迎你的欣赏
10 0.05 0.04 0.06 0.06 方差分析2
变异来源 SS df MS F P 总变异 0.002176 39 组间 0.000257 3 0.000086 1.606658 >0.05 组内 0.001919 36 0.000053 按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。
表3 四种方案处理后小鼠肝脏匀浆蛋白浓度（g/L） CdCl2(mg/kg) 生理盐水 合计 0.050 0.10 0.20
1 3.355 2.962 2.325 2.937 2 6.024 4.528 10.641 4.223 3 0.758 2.342 5.912 4.328 4 6.872 8.791 11.710 4.584 5 7.610 7.338 9.278 1.573 6 10.025 4.606 -0.282 5.121 7 6.074 4.391 6.273 2.586 8 5.702 5.050 8.860 7.271 9 5.660 6.557 3.895 5.295 10 3.560 2.590 4.800 6.563 排除异常值之后 例数 10 10 9 10 39
平均值 5.564 4.916 7.077 4.448 5.493 标准差 2.545 2.108 3.203 1.755 2.538673 方差 6.477 4.442 10.260 3.079 6.444862 方差分析表3
变异来源 SS df MS F P 总变异 244.905 38 组间 36.88 3 12.29 2.068 >0.05 组内 208.025 35 5.94 按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
表4 四种方案处理后小鼠肝脏匀浆SOD活力值（U/mgprot） CdCl2(mg/kg) 生理盐水 合计 0.050 0.10 0.20
1 -4.514 34.245 7.822 31.482 2 3.114 15.163 6.811 20.051 3 126.040 33.385 15.966 17.670 4 14.953 1.159 8.775 18.510