酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）
是一种常用的生物化学分析方法，用于检测并定量测定生物样品中的抗体
或抗原。

ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞
争ELISA等。

下面将对这些方法的类型和反应原理进行详细介绍。

1.直接ELISA
直接ELISA是最简单的ELISA方法之一、在这种方法中，微孔板表面
上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。

待检测样品中的抗体与
涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

然后加入特异性抗体，这些抗
体已标记有酶，比如辣根过氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP），然后加入适当的底物。

酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与
待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。

2.间接ELISA
间接ELISA是常用的ELISA方法之一，比直接ELISA灵敏度更高。

在
这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。

待检测样品中的抗体与涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

然后加
入与待测抗体特异性的二抗，这些二抗已标记有酶，如HRP，再加入适当
的底物。

酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗
原或抗体的浓度成正比。

3.竞争ELISA
竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的ELISA方法。

在
这种方法中，微孔板表面上涂覆有特异性抗体，然后加入待检测样品和已
标记的抗原或抗体。

待检测样品中的抗原或抗体与涂覆的抗体竞争结合，
形成复合物。

然后加入特异性的抗原或抗体，这些抗原或抗体已标记有酶，比如HRP，继续竞争与涂覆抗体结合。

酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成反比。

4.间接竞争ELISA
间接竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的高灵敏度ELISA方法。

在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原。

首先，加入待检
测样品和已标记的抗原或抗体。

待检测样品中的抗原或抗体与特异性抗体
竞争结合，形成复合物。

然后加入未标记的特异性抗体，再加入已标记的
二抗，如HRP，继续竞争与涂覆抗原结合。

酶与底物反应产生比色或荧光
信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。

ELISA的反应原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应。

ELISA
的微孔板表面通常涂覆有抗原或抗体，待检测样品中的抗体或抗原与涂覆
的物质结合形成复合物。

经过清洗步骤，加入与样品中的抗体或抗原特异
性结合的二抗，这些二抗已标记有酶。

然后加入适当的底物，底物与酶反
应产生比色或荧光信号。

这些信号的强度与待测样品中抗体或抗原的浓度
成正比，通过比色或荧光检测设备可以定量测定待测样品中抗体或抗原的
浓度。

总的来说，ELISA是一种简单而有效的生物化学分析方法，广泛应用
于医学诊断、生物学研究、药物研发等领域。

不同类型的ELISA方法有不
同的适用范围和优势，可以根据具体实验需求选择合适的方法进行检测和
分析。