二、蓄积作用的研究方法
目的：通过蓄积试验求出蓄积系数K，了解化学 物蓄积毒性的强弱，并作为慢性毒性试验及其 它有关毒性试验的剂量选择提供参考。 蓄积系数法 生物半衰期法
（一）蓄积系数法
蓄积系数(accumulation coefficient)：指多次染毒使半数 动物出现某种效应的总量与一次染毒的半数效量之比值。 一般采用大鼠或小鼠，以死亡作为效应指标。 K=ED50(n)/ED50(1) 或 K=LD50(n)/LD50(1) ED50(n):以慢性方式多次接触受试物时产生预期效应的 累积剂量之和。 ED50(1):一次接触该物质产生相同效应的一次剂量。
＊1. 实验动物的选择 ＊2. 剂量设计与分组 ＊3. 染毒途径与时限 ＊4. 观察指标
五、长期毒性试验的注意事项
重视实验项目管理：选择经验丰富的专业人员对项目的设计和实施 进行管理，保证仪器设备状态良好，工作人员专业培训。
实验室环境的要求：注意动物饲养和试验环境的规范化，符合 GLP 。
蓄积系数的评价
蓄积系数（Ｋ） 蓄积作用分级
<1
高度蓄积
1-
明显蓄积
3-
中等蓄积
5-
轻度蓄积
1. 固定剂量法
方法：
（1）急性毒性实验
LD50(1)
（2）1/20-1/5LD50 每日染毒
LD50(n)
（ 50%动物死亡时累计染毒的总量）
（3）计算K值：K=LD50(n)/LD50(1)
若累计染毒量已达到5个LD50，动物仍未死亡或死 亡未达到半数，可终止实验，其Ｋ值按 ＞５作为结果。
蓄积库（depot）：化学物蓄积的组织器官部位。常见 的蓄积库包括： 血浆蛋白 脂肪组织 肝脏、肾脏 骨骼
化学物蓄积作用分类
物质蓄积：化学物在体内逐渐积累增多，用分析方法可 以检测出物质的原型或代谢产物。
损伤蓄积：又称功能蓄积，化学物长期接触后，机体内 虽然不能测出其原型或代谢产物，却出现了慢性毒性作 用的表现。
t1/2=0.693/Ke （２）蓄积极限值的求得：
蓄积极限值＝1.44(常数)×每日给予量(吸收量)×半衰期 t1/2
第五节 短期、亚慢性和慢性毒性作用
一、基本概念
短期重复剂量毒性：实验动物或人连续接触外源化学物 14-30天所产生的中毒效应。
亚慢性毒性（subchronic toxicity）：实验动物或人连续 较长期接触外源化学物所产生的中毒效应。接触时间相 当于生命周期的1/10，通常为1-6个月。
２. 递增剂量法
方法： （1）测定LD50(1) （2）第1-4天，先给予0.1LD50(1)，以后每4天 递增剂量1.5倍
LD5Байду номын сангаас(n) （3）计算Ｋ值。
28天时死亡动物仍未达到半数，可停止实验，此时的 总量达到12.8LD50(1)，即Ｋ＞12.8，可认为基本无蓄积。
３. 剂量固定的20天蓄积法
六、长期毒性试验的结果评价
剂量相关趋势：最好的试验结果是最高剂量组中毒效应明显，中剂量 组有轻度表现，低剂量组无任何异常毒效应。
差异大小和性别差异：差异越大，更有关联；同时观察两种性别。
相关指标变化：处理组某项指标变化，伴随着相应的指标改变，这种 效应可能与处理有关。
反应重现性：重复性包括在研究中不同时间点、同一物种动物在其他 的独立研究中，或在另一个物种发生相同的异常。
检测条件的控制：必须具有标准操作规程， 仪器设备的稳定性，辅助条件的可靠性； 指标的测定要准确，方法先进、精密、可靠。
合理的实验设计：得到明确的剂量-反应关系，获得理想的LOAEL 和NOAEL。
重视试验前和对照组的检测： 实验前对动物预测观察指标进行正常值的测定，去除个体差异 较大的实验动物； 设立合理的对照组，观察指标应是对照组与实验组同时观察。
历史性对照的作用：①可以识别异常的阴性对照；②可以更好的理解
低发生率的发现；判断是否在正常生物变异范围内；③如果指标变化
慢性毒性（chronic toxicity）：实验动物或人长期（甚 至终生）反复接触外源化学物所产生的毒性效应。长期 一般是指实验动物的一生或一生中的大部分时间，至少 6个月以上，通常是24个月。
二、实验目的
观察长期接触受试物的毒性效应谱、毒作用特点和毒 作用靶器官，了解其毒性机制。
观察长期接触受试物毒性作用的可逆性。 研究重复接触受试物毒性作用的剂量-反应（效应）关
（二）生物半衰期法
从上图可以看出，一种化学物质若以t1/2相等的时间间距染毒，其在体内经 过6个t1/2的接触期就可以基本上达到蓄积的极限，此时理论蓄积量达到极 限的98.4%，此后即使继续接触该物质，机体的蓄积量基本上也不会增加。
（１）t1/2的测定：当机体接触受试物后，测定不同时间体内 血浆中该物质的浓度。以时间ｔ作横坐标，血浓度Ｃ作纵坐 标，绘图，得一直线，从图中求消除速率常数Ｋe。
系，获取毒性作用参数，如NOAEL和LOAEL，为制 定人类接触的安全限值提供依据。 确定不同动物对受试物的毒效应的差异，为将研究结 果外推到人提供依据。
三、亚慢性毒性试验方法的要点
＊1. 实验动物的选择 ＊2. 剂量设计与分组 ＊3. 染毒途径与时限 ＊4. 观察指标
四、慢性毒性试验方法的要点
第六章 化学毒物的一般毒性作用-亚慢 性和慢性毒性
第四节 蓄积毒性作用及其评价
一、基本概念
外源化学物连续的反复的进入机体，而且进入机体的 吸收速度或总量超过了其代谢转化排出的速度或总量 时，化学物质就可能在体内逐渐的增加并贮留，这种 现象就称为化学物质的蓄积作用（accumulation）。
方法：分为1/2、1/5、1/10、1/20 LD50四个剂量组和对照 组，每组10只动物，每天染毒一次，共染毒20天，观察 每组动物死亡数量。
结果判定： ① 蓄积不明显：各剂量组均无死亡； ② 弱蓄积性：仅1/2 LD50组有死亡，其它剂量组无死亡； ③ 中等蓄积性：1/20 LD50组无死亡，其它各组间死亡数 有剂量反应关系； ④ 强蓄积性：1/20 LD50组有死亡，且有剂量反应关系。