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培养基的质量控制

5.3性能评价和结果解释
按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定,则该批培养基品质优良;若只有物理指标和微生物指标符合规定,则该批培养基可被接收。
表1 计数用选择性培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
参考培
养基
控制方法
判定标准
特征反应
Baird-
Parker
[S]
生长率
37℃24-48h
金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923
从每批制备好的培养基中选取至少一个(或1%)平板或试管,置于37℃或按特定标准中规定的温度培养18h。
5.2.2生长特性
5.2.2.1生长率
惠山疾控
作 业 指 导 书
编号:HSCDC/GC-76-2009
培养基质量控制规程
版本 / 修改次:1/0
第2页 共6页
将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中,每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。
——
定性
全部抑制
——
VRBL(紫红胆汁乳糖)
[S]
生长率
30℃20h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA
定量
PR≥0.5
带有或不带沉淀带的淡紫色菌落
选择性
30℃20h
粪链球菌ATCC29212/19433
——
定性
全部抑7853
——
定性
--
无色至浅棕色菌落
TSA
定量
PR≥0.7
具沉淀带的粉色菌落
选择性
37℃48h
大肠杆菌ATCC25922
——
定性
全部抑制
——
特异性
37℃48h
枯草芽胞杆菌ATCC6633
——
定性
——
不具沉淀带的粉色菌落
惠山疾控
作 业 指 导 书
编号:HSCDC/GC-76-2009
培养基质量控制规程
版本 / 修改次:1/0
第3页 共6页
4.3 贮存及使用前质量确认
4.3.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。
4.3.2验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”,使用前对容器密闭性进行复查。
4.3.3开封的脱水培养基,每次使用前应对其质量进行检查,通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。
CT-SMAC(改良山梨醇麦康凯琼脂)
5.1物理指标控制
5.1.1测试20℃~25℃的pH值
5.1.2琼脂层厚度;色泽;透明度和(或)是否存在肉眼可见杂质;凝胶稳定性、粘稠度和湿度。
5.2微生物学指标控制
可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法(详见表1-表)对培养基性能进行测试,具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。
5.2.1微生物污染的控制
表1计数用选择性培养基(续)
培养基
用途
培养条件
测试菌株
参考培
养基
控制方法
判定标准
特征反应
VRBG(结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂)
[S]
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA
定量
PR≥0.5
带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
选择性
37℃20h
粪链球菌ATCC29212/19433
3.2 科室负责人:负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。
4.使用前的质量控制
4.1生产企业提供的材料
培养基生产厂家随产品应提供下列文件:
培养基、独立成分、添加成分名称;批号;使用前的pH;储藏信息和有效期;性能评价和所用测试菌株;技术数据清单;质控证书/必要的安全、危害数据。
4.2验收
实验室收到培养基后,应填写“培养基验收检查记录单”,检查包装及完整性,标识是否清晰等,验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。
TSA
定量
PR≥0.5
黑色/灰色菌落,周围为一混浊带,其外有透明带
选择性
37℃48h
大肠杆菌ATCC25922/8739
——
定性
全部抑制
——
特异性
37℃24-48h
表皮葡萄球菌ATCC12228
——
定性
——
黑色/灰色菌落,周围为一混浊带,其外无透明带
MYP
[S]
生长率
30℃24-48h
腊样芽胞杆菌ATCC11778
惠山疾控
作 业 指 导 书
编号:HSCDC/GC-76-2009
培养基质量控制规程
版本 / 修改次:1/0
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1.目的
规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。
2.适用范围
适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。
3. 职责
3.1 检验人员:按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制,确保培养基符合相关标准的要求。
5.2.2.1.2 半定量方法
半定量方法采用生态测量技术在平板上划线,平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G,G值不应超过标准规定的允许范围。
5.2.2.1.3 定性方法
定性方法采用划线法观察。
5.2.2.2选择性
将浓度为104CFU/mL~106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中,培养基的选择性应达到规定值。
4.3.4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”,每次使用前应检查:颜色是否发生变化?/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等。如果发生上述异常情况,则不应再使用。
5.制备好的成品培养基的质量控制
新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,符合要求后使用。
成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试,根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。
5.2.2.1.1定量方法
生长率PR的计算:PR=NS/NO
NS:从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。
N0:从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数(该菌落总数应≥100cfu )。
要求:非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1;每平板(或每试管)的接种水平为10CFU~100CFU。
5.2.2.2.1定量方法
选择因子SF:SF=DO-DS
DO:能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度
DS:能在测试培养基上显示生长的最高稀释度
要求:非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ;半定量和定量法中,非目标菌应部分或全部被抑制。
5.2.3生理生化特性(选择性和特异性)
规定培养基的基本特性,使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性(菌落形态、大小等)和非目标菌的被抑制程度进行测试。
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