常用接种方法——穿刺法
葡萄糖半固体培养基
动力阳性的细菌则沿 穿刺线扩散生长，动力阴
性的细菌仅沿穿刺线生长
常用质控方法



灵敏度测定法 混合增菌培养法 测定增菌倍数法 特异性测定方法
灵敏度测定法

质控菌株
乙型溶血性链球菌 短小芽孢杆菌

实验方法
1.制备108菌悬液，10倍稀释至10-8。 2.选取适宜的3-4个连续稀释度，接种1mL于9mL待检测的 培养基中，每个稀释度接种3管，37℃培养3d。 3.接种管2/3生长的最高稀释度即为该培养基的灵敏度。
微生物学指标的质量控制
常用接种方法 常用质控方法及应用

常用接种方法——划线法
常用接种方法——涂布法
选择适当稀释倍 数的菌液或样品 稀释液滴加到铺 好的平板上，用 “L”棒涂干。
常用接种方法——倾注法
先加入1ml菌悬液，再倒培养基混 匀，待培养基充分凝固后倒臵培养
常用接种方法——螺旋涂布法
保存与活化2
菌种保存的原则 根据微生物生理 、生化特点，人 工创造条件，主 要是低温、干燥 、缺氧三者，使 微生物的代谢处 于不活泼、生长 繁殖受抑制的休 眠状态，以达到 保持纯种优良性 状的目的。
♣一般长期保存方式
液氮保存：液氮低温保存，长达10年以上 时间 冻干保存：加保护剂(脱脂奶粉)制成真空冻 干粉, 一般10年左右 甘油保存：15~20%甘油作保护剂,低温( 80℃)保存, 一般2~3年
培养基分类——功能
基础培养基——含有适合大多数微生物生长需 要的营养物质。 选择性培养基——含有目标菌生长需要的特殊 营养物质，及抑制非目标菌生长的抑制剂。 ◆增殖培养基-液体 ◆分离培养基-固体 鉴别培养基——通过指示剂或指示剂和抑菌剂 的共同作用,鉴定某种微生物。
使用方便
培养基分类——制备工艺
混合增菌培养法——定性


例：SC肉汤
质控菌株的选择

生化性状典型的阳性质控菌 生长相对较弱的阳性质控菌 生长但不具备目标菌生化特征的质控菌 生长被抑制的阴性质控菌
干粉培养基的质量控制

理化指标的质量控制 微生物学指标的质量控制
理化指标的质量控制 Nhomakorabea
色泽：因品种而异，但同一品种批间差异不宜过大。 水分含量：国内规定＜7%（陆桥控制在＜5% ）。 澄清度：除个别特殊品种外，应澄清，无絮状物，无沉淀。 pH值：指灭菌后冷却至25℃时的测定值。 ①比色法：利用指示剂在不同pH溶液中的颜色变化，与标 准比色管或比色板相比得出pH值。 ②电极式pH计：有分别测定固体和液体pH值的两种电极。 凝胶强度： ①使用凝胶强度测定仪测定固体培养基的凝胶强度； ②固体培养基应保证划线适宜为宜。
培养基的组成
为满足微生物生长和 代谢的需要，培养基一般 包含碳源、氮源、水、无 机盐、能源和生长因子六 大类营养物质。
培养基分类——组成成分
◆天然培养基：由化学成分不完全明了 的天然物质组成。（很难保证稳定性） ◆半合成培养基：由不明化学成分的天 然物质和已知化学成分的物质组成。 ◆合成培养基：由已知化学成分的物质 组成。（可以做到稳定性一致）

ISO 11133：2003 Part-1

Reference Strain Reference Stock Working Culture
保存与活化1
Reference strain (冻干菌种）
转种活化
Reference stock （冰箱保存的第一代培养物-80℃）
转种活化
Working culture （用于培养基微生物质控的新鲜培养物）
♣一般短期保存方式
半固体穿刺：4℃冰箱保存半固体培养物 斜面保存：4℃冰箱保存斜面培养物
保存与活化3

菌种活化
一般冻干菌种活化
接种营养型液体培养基(NB/TSB/BHI/TSB-YE)进行培 养活化; 一般工作菌种活化 除采用上述营养液体培养基外，还可转接固体、半 固体、斜面等营养型培养基进行培养活化。

菌种来源：从菌种保藏中心购臵（中国微生 物菌种保藏中心） 菌种质控的常规检验：纯度、同源性、形态 特征 只有质控合格的菌种才能用于实验室保存株 （Reference Stock）的制备 实验室必须设立专门地方用于菌种保存，必 须严格遵照实验室制定的安全使用的有关规 定及防护措施
几点使用说明2
菌悬液的制备

比浊
麦氏比浊仪:挑取纯的单菌落用无菌生理盐水 悬置，麦氏浊度仪透光比浊，制备0.5MFC （相当于108CFU/ml)。 标准比浊管：BaSO4混浊液，使用前振摇比 浊管，使悬浊液分散均匀。

估算浊度
一般细菌在TSB中培养4~5h，菌悬液浓度大 致相当于107-108CFU/ml。
几点使用说明1
培养基分类——物理状态
液体培养基——不含凝固剂，利于菌体的快速繁 殖、代谢和积累产物。 流体培养基——含0.05-0.07%琼脂粉，增强培养 基的黏度，可降低空气中的氧气进入培养基的速度， 使培养基保持长时间的厌氧条件，有利于一般厌氧 菌的生长繁殖。 半固体培养基——含0.2-0.8%琼脂粉，多用于细 菌的动力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料 等。 固体培养基——含1.5-2%琼脂，多用于细菌的分 离、鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等方面。
★自行配制——成本相对较低，但繁琐，质量不稳 定。 ★“Ready-to-Use”——使用方便，但保质期短， 运输不便。 ★干燥培养基——使用方便，质量稳定，易保存， 推广空间广阔。
※国外：Oxoid, Difco, Merck等 ※国内：陆桥等
使用方便
质控菌株
保存与活化 菌悬液制备 几点使用说明
培养基的质量控制及应用
Introduction and Quality Control of Dehydrated Media
内 容 提 要



培养基的简介 质控菌株 干粉培养基的质量控制 干粉培养基使用常见问题
培养基的简介
★培养基的定义 ★培养基的组成 ★培养基的分类
培养基定义
培养基是按照微生物生 长繁殖或积累代谢产物所需 要的各种营养物质，由人工 配制而成的营养基质，专供 微生物培养、分离鉴别、研 究和保存用。