12
表型药敏试验
V.S.
V.S.
13
固体罗氏培养基法与液体培养基法DST的比较
不同方法
药物种类
价格 （ＲＭＢ）
从培养到获得DST 结果 2-3个月
罗氏培养基
多种（除PZA外） 15元/药
液体培养基
多种（包括PZA） >100元/药
2-4周
14
微孔板法药敏试验
板式药敏试验的技术特点：
1. 包含的药物种类较多，包括是包括了一些新型的抗结核药 物，如莫西沙星，克拉霉素，阿莫西林/克拉维酸钾、氯 法齐明。 2. 获得耐药浓度，发现中度敏感/低度耐药菌株。 3. 缩短报告结果时间。一般2周，特殊情况下3周报告结果。 4. 提高了标准化程度。药敏培养板的制备实现了标准化，结 果的读取依赖专业设备，有利于质量控制。
8
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 （1）
Clinically susceptible strains (PS)
Frequency of strains
Clinically resistant strains (PR)
Break Point MIC
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
绝对浓度法
10-3 mg
IHN：1，10μg /ml SM：10，100μg /ml RFP：50，250μg /ml EMB：5，50μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
报告结果时间
4-6周
4周
6
绝对浓度法和比例法药敏试验出现结果差异
用两种药敏试验方法测定了360株结核分枝杆菌对H、R、S、E的药敏性, 两种方法的符合率： H R S E 81.1% 92.5% 83.6% 98.6%
3
药敏试验结果的不一致问题
1. 同一份患者不同时间留取的标本结果不一致 2. 同一份患者不同的方法间结果不一致
4
比例法和绝对浓度法的选择
5
绝对浓度法与比例法的差别
差异
接种菌量 培养基药物浓度
比例法
10-4 mg和10-6 mg
IHN：0.2μg /ml SM：4.0μg /ml RFP：40μg /ml EMB：2.0μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
70.37%
92.59%
90.48%
98.38%
76.0%
99.46
91.18%
91.49%
88.57%
93.48%
68.97%
93.66%
46.51%
97.42%
92.59%
87.04%
78.13%
95.92%
李卫彬.中华临床医师杂志.2012
全自动的利福平耐药检测实时PCR体系 （Xpert MTB/RIF）
-份是中敏对耐药 、 、 、 10 17076 17081 17082 17085、18013、18014、18026、18043、18049、 81.40% 18051，3份是敏感对耐药18002、18015、18050 96% 3人份中敏对敏感18012、18026、18039 88.60% 3人份中敏对敏感18038、18026、18002 ，5人份中敏对耐药18039、18033、18015、18014、 18013 人份中敏对敏感、 人份无法判读（跳孔）对敏感 97.10% 1 1 84.30% 94.30% 2人份中敏对敏感，9人份中敏对耐药 4人份中敏对耐药
INH and RIF
2
药物敏感性试验的方法
一、表型药敏试验
ü固体培养基药敏试验：绝对浓度法; 比例法 ü液体培养基药敏试验：MGIT960; BacT/ALERT 3D； üMIC测定：药敏板法
二、分子药敏试验
ü基因测序 ü间接基因测序法: 线性探针杂交技术；基因芯片；GeneXpert；HRM
*179 clinical isolates
Sensitivity 88.6 79.3 --
Specificity 98.8 98.8 --
李强.中国防痨杂志.2009
与传统药敏试验相比Hain LPA 诊断MDR的可靠性 评估（盖茨项目）
城市 sensitivity （95%CI） 城市一 60% (22.36~97.64%) 67.27% (42.96~91.58%) 66.67% (23.99~100%) 71.43% (33.56~100%) 66.39% (49.75~83.03%) specificity （95%CI） 95.53% (89.6~100%) 96.28% (91.85~100%) 98.63% (96.5~100%) 98.83% (96.6~100%) 97.72% (96.08~99.36%) PPV （95%CI） 65.22% (27.07~100%) 78.72% (55.79~100%) 66.67% (23.99~100%) 78.95% (43.02~100%) 73.83% (57.51~90.15%) NPV （95%CI） 94.48% (87.96~100%) 93.5% (87.81~99.19%) 98.63% (96.5~100%) 98.26% (95.56~100%) 96.78% (94.85~98.71%)
线性探针杂交技术
Line Probe Assay（LPA）
Visual result reading for GenoType® MTBDRplus
基因分型结果判读
First reported data from China on HAIN LPA*
Subgroup Rifampicin Isoniazid MDR
培养（液体、固体 ） 培养（液体、固体 ） 培养（液体） 培养（液体、固体 ） 涂片、病理阳性和/ 或培养（液体、固 体） 培养（液体、固体 ） 联合涂片、培养和 临床 培养（液体、固体 ）或临床诊断 培养（液体、固体 ）或临床诊断
西班牙 印度 土耳其 意大利
108 283 48 268
41 250 128 1206
比例法诊断耐药的比例高于绝对浓度法 对两种方法不符合的菌株的MIC测定显示：这些菌株对相应药物的MIC值都 接近临界值。
刘宇红.中华结核和呼吸杂志.2000
7
耐药诊断临界值的确定:
(1)能够最大限度的区分临床上可能的敏感株和可能 的耐药株； (2) 这个浓度应该是血和组织浓度可以达到的； (3)当以这个浓度诊断细菌学耐药时，可能会出现临 床反应性降低。
以固体药敏试验为对照评估板式药敏试验结果
70人份对照药物符合率统计
TCH PNB SM INH EMB RFP RFT LFX AM CM PAS RFB PTO/ET O 总数/ 符合数/ 符合率 份 份 70 70 100% 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 70 68 69 68 69 70 57 67 62 68 59 66 100% 97.10% 98.60% 97.10% 98.60% 100% 备注（微孔板对罗氏） --2人份敏感对耐药（长到第二孔）：18012、17076 17993（0.8浓度敏感对1浓度敏感） 2人份敏感对耐药17999、18044 1人份敏感对耐药18026(NTM)
结核分枝杆菌药敏试验结果的判读
国家结核病临床实验室
1
结核病耐药问题提高了临床对DST的需求
I
a e r nc
s
Tr g in
end
TDR XDR
Almost all the drugs
MDR DR
Any one or more Other than MDR/XDR
MDR Plus Quinolone and Aminoglyocside
周杨.中华检验医学杂志.2011
一个地市级实验室的芯片评价结果
芯片 MDR (初治) MDR (复治) RFP 耐药 (初治) RFP 耐药 (复治） INH 耐药 (初治) INH 耐药 (复治) 敏感性 63.64% 特异性 98.16% PPV 50.0% NPV 98.94%
82.61%
86.21%
97.8% 73.1% 99.0% 96.5% 99.5%
Xpert MTB/RIF 对肺外结核的诊断效率
国家 法国 西班牙 南非 德国 南非 结核确 诊病例 32 41 20 45 30 非结核 病例 NA 299 5 476 18 样本（例数） 淋巴结(16)；胸水(7)；骨(5) 活检组织(18)；CSF(6)；胃 液(4)；脓性分泌物(5)； 胸水（25） 组织(30)；胃液(8)；尿(5) 淋巴结针吸活检组织 对照方法
胸水(26)；淋巴结(34)；脓 肿吸出物(17)；组织(12) 组织活检标本(25)；脓(98) ；体液(24) 胸水，淋巴结，CSF，尿， 皮肤活检标本，心包积液 活检物(94)，胸水(18)，胃 液61)，脓(55)，CSF(14)， 尿(16)，腹水，关节液，心 包积液(10)
分子药敏技术的特点
ü 检测耐药相关基因的突变情况。 ü PCR扩增目的基因是前提。 ü 一般可以在标本获取后几个小时内完成检测。 ü 方法的灵敏度和特异度主要取决于被检测的耐药基因与耐药 的相关性，但生产工艺也对结果的准确性至关重要。 ü 来自不同厂家的产品检测的原理一致，所不同的是结果的展 示方式。
城市二
城市三 城市四
合计
基因芯片技术
Microarray/Bio-Chips
芯片结果图例
3个中心实验室评价芯片结果
分组 Rifampicin Isoniazid MDR 敏感性 92.0 77.4 74.6 特异性 97.2 96.9 98.0
*1186 isolates consist of 800 RFP resistant strains,797 INH resistant strains,791MDR strains,and 380 RFP-INH sensitive strains.