采用 L-J 培养基
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(n=81) (n=111)
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结核分枝杆菌传统药敏试验方法
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基于标本的药敏检测系统
-直接法
直接涂片法（涂片阳性） 优点: 结果快; 更好的反映耐药情况 缺点: 大多数药敏试验不理想;接种量不容易标化/ 可行性较差
-间接法
对结核分枝杆菌进行培养后进行药敏试验 优点: 更好的控制接种量 缺点: 结果延迟
结核分枝杆菌传统药敏试验方法
结核分枝杆菌传统药敏试验方法
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不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药 菌株最低抑菌浓度的分布
Frequency of strains Cumulative percentages
Break
point
PS
PR
100 ISONIAZID
90
80
70
13.1 as “R”
PS(99 strains) PR(117 strains)
3
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以传统的生长检测为基础的药敏试验方法
以传统生长检测为基础的方法
WHO（1963）的标准方法
绝对浓度法- Meissner
- 标化接种量; 药物浓度梯度
抗性比率法- Mitchison
- 克服培养基中药物浓度变化的缺点
比例法- Canetti / Grosset
- 临界浓度比例,更好的控制接种量
噬菌体检测: FASTPlaque; Bonx box (LRP)
结核分枝杆菌传统药敏试验方法
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以检测基因突变为基础的快速药敏试验系统
-扩增目标区的DNA测序 - 聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术; - 探针杂交：反向探针线性杂交方法； Hain 分枝杆菌药物抗性pl us -分子灯塔/信标： GeneXpert系统是一个将样品准备、定量扩增 和荧光检集于一身并自动进行核酸检测分析的系统; LAMP (Eiken) 核酸环介导等温扩增技术 -高效液相色谱应用与扩增的DNA 的突变检测
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可能敏感/可能耐药菌株对利福平的最小抑菌 浓度的累积分布（此试验采用 L-J 培养基用绝对浓度法）
85.8
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不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药 菌株最低抑菌浓度的分布
Break point
*Inoculum variation
Clinically susceptible strains (PS)
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以快速培养生长检测为基础的药敏试验方法
快培生长系统
观察显微镜下的微小菌落:
- 玻片培养；显微镜观察的药敏试验（MODS）
代谢情况检测:
- CO2 产生量(放射BACTEC 460; 色素变化 MB/Bact 3D) - O2 消耗 (荧光产生 MGIT960) - TREK系统 (ESP 培养系列 II) - 微盘： 阿莫拉蓝试验 (指示管)/TEMA - ATP 产生, 生物荧光试验
[G Canetti/ J Grosset, France; S Froman, USA; P Hauduroy, Switzerland;
M Langerova/ L Sula, Czechoslovakia; HT Mahler (WHO); G Meissner,
Germany; DA Mitchison, England]
60
50
75.8
40
30
20
10
0 2 mcg/ml
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
11.1 as “S”
0
0.1
0.2
0.4
0.8
1.6
Minimal inhibitory concentrations (mcg/ml)
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药敏试验的目的
• 耐药监测
- 评估治疗方案
- 选择有效的标准方案
• 病例管理
- 诊断耐药结核病(耐多药/广泛耐药结核病 ）
- 为个体病例(耐多药/广泛耐药结核病）选
择有效的方案
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问题
► 可靠性: 技术重复性/ 临床反应预
测 ► 周转时间 ► 操作可行性及可持续性 ► 成本
1 SD
Break point
Frequency of strains
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3 SD
Minim结a核l i分n枝h杆ib菌it传o统ry药c敏o试n验c方en法trations (MIC)
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最小抑菌浓度
不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药 菌株最低抑菌浓度的分布
Frequency of strains
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PS = >100 菌株; PR = >50 菌株
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Cantti G, et al. Bull WHO 1969; 41:21-43.
可能敏感菌株/（可能无耐药性菌株）在不同药 物浓度下的抑菌分布
Clinically susceptible strains (PS)
Clinically susceptible strains (PS)
Break point
Clinically resistant strains (PR)
*Technical variation (inoculum/ media/ drug concent.)
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
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可能敏感和可能耐药的结核分枝杆菌临床 分离株对氧氟沙星敏感性分析
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药敏试验的结果可靠性
治疗结果的预测值- 药敏试验的耐药 标准
试验可靠性 - 试验精确度& 可重复性
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药敏试验的校正
获得最相关的临床耐药标准
▽ 可能的敏感株的敏感级别
▽在治疗反应变化方面测定敏感性水平
▶从未接受过治疗的患者(PS)与至少接受5/6个月治疗的患 者(PR)的标本菌株的敏感性进行比较