最常用组织切片标本制备技术 基本程序：①取材：0.5cm
②固定：甲醛、乙醇 ③脱水：如果是冰冻切片则不需要此步骤 ④包埋：石蜡、火棉胶、树脂 ⑤切片：组织切片机、冰冻切片机 ⑥脱蜡：如果是石蜡包埋则需要此步骤 ⑦染色：最常用染色方法为HE染色 ⑧封片：
2.非切片法：涂片法、铺片法、磨片法等。
常用染色方法：HE染色
组织学与胚胎学
Histology and Embryology
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组织学
histology
绪论
Introduction
一、组织学的定义和研究内容
组织学(histology)：研究机体微细结构及其相关功能的科学。
上皮组织
细胞 细胞间质
结缔组织 组织
肌肉组织
器官
系统
用于观察生活细胞和末经染色细胞的形态结构
⑵荧光显微镜(fluorescence micrscope)
是用以观察细胞、组织内荧光物质的分布
⑶激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope，CLSM)
由激光光源、共焦成像扫描系统、电子光学系统和微机图象分析系统四 部份构成。
抗体检测未知抗原(组织细胞内某些多肽、蛋白质等大分子物质)的 存在与分布的一种方法。
直接法
间接法--PAP法
间接法--ABC法
(五)原位杂交术--核酸分子杂交组织化学技术
原位杂交(in situ hybridization)是 一种敏感性高、特 异性强的，能在组 织细胞原位进行的 核酸分子杂交技术。
(二)电子显微镜技术(electron microscope, EM)
冰扫分冻描析蚀透电刻射镜照电与－片镜照X线与片微照区片分析图片
透射电镜(transmission electron microscope, TEM)
观察细胞内部结构；分辨率为0.1-0.2nm,可放大几万－几十万倍
扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)
可对样品进行断层扫描重建三维图来自，进行体视学分析；测定细胞内pH、 钙浓度等；精确地检测、识别组织细胞的微细结构及其变化。又称细 胞CT。
⑷倒置显微镜(inverted mi神cr经sc干op细e)胞培养 ⑸暗视野显微镜(dark field miCcMrLoSscope) ⑹偏光显微镜(polarization mi神cr经os球cope)
器官organ：由组织有机组合而成，具有一定的形态结构，并执行特定的生 理功能。如心、肝、脾、肺、肾。
系统system：由一些结构连续、功能相关的器官组合而成，完成连续的生 理活动。
组织学结构观察
组织学结构
光镜结构：用光学显微镜观察的结构 (light microscope，LM，简称光镜)
电镜结构：又称超微结构，电子显微镜下观察的结构 (electron microscope, EM，简称电镜)
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2020/12/13
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(三)组织化学和细胞化学技术
1.糖类显示法： 过碘酸-希夫反应(periodic acid Schiff reaction，PAS反应)：
检测组织或细胞中有无多糖存在。 PAS反应阳性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在 基本原理：多糖 过碘酸 醛 Schiff试剂 紫红色沉淀
嗜酸性
嗜碱性
其它染色方法
A 嗜银性 B 嗜铬性 C 异染性
普通光学显微镜
(light microscope，LM)
是观察组织细胞微细结构最常用的工具
光学部分：起放大作用 光镜的分辨率约为0.2µ m 可放大1500倍左右
机械部分：
几种特殊光学显微镜术
⑴相差显微镜(phase contrast microscope)
二、组织学的常用研究方法
组织学研究过程中存在的问题和解决方法
问题 观察对象太小 观察对象无色，无反差 观察对象生化成分不同 观察对象是活体
解决方法 显微镜放大 染色(如HE染色) 组织化学、免疫组织化学 培养
(一)光学显微镜技术
组织学与胚胎学最常用的技术，最大放大倍数常为1000倍。 1.切片术
苏木精 (Hematoxyli
n) 碱伊性红染料 (Eosin) 酸性染料
细胞核中的染色质 细胞质中的核糖体
细胞质 细胞间质成份
染成蓝色 (嗜碱性)
染成红色 (嗜酸性)
组织结构的嗜色性
嗜碱性：对碱性燃料有较强亲和力，可使细胞核内的染色质及细胞质内
的核糖体等结构染成蓝紫色
嗜酸性：对酸性染料有较强亲和力，可使多数细胞的细胞质染成粉红色 中 性：与两种染液亲合力都不强
氧化
PAS阳性 小肠上皮
2.酶类显示法：
酸性磷酸酶(ACP)显示法
3.脂类显示法： 4.核酸显示法：
福尔根反应 甲基绿-派若宁反应
脂锇类酸显示髓法鞘染苏色丹Ⅲ 核酸显示法：甲基绿-派若宁反应 酶细胞化学 神经元ACP酶阳性
(四)免疫组织化学和免疫细胞化学技术
是将免疫学原理与组织化学和细胞化学技术相结合建立的新技术. 利用抗原(antigen，Ag)，抗体(antibody)特异结合的原理，用已知
人体
神经组织
细胞cell：是机体形态结构与功能的基本单位。
细胞间质intracellular：由细胞分泌产生，对细胞起支持、营养、保护 等作用，构成细胞生存的微环境。
组织tissue：由一些形态结构相似、生理功能相近的细胞和细胞间质组成 的群体结构，是构成机体器官的基本成分。分为上皮组织、结缔组织、 肌组织和神经组织等4种基本组织。
观察组织或细胞表面的立体结构
冰冻蚀刻复型技术(freeze etch replica method)
观察细胞断裂表面形态结构
X-射线显微分析术(X-ray microanalysis)
研究细胞、组织内元素种类分布和含量
冷冻割断技术(freeze cracking) 扫 超描高电电镜 压铸电分型镜析技(电ul镜术tr(asvcoalntnaigneg eelleeccttrroonn1m.mi纤iccr毛淋rooXs巴sc线co2细op微.pe微胞e,区绒cU分aEsM毛析t)ing) 扫冰描冻探蚀针刻电镜细TE(胞Mscanning pr冷ob冻e m断ic裂rosco肾pe小, 球SPM) 右下 线粒体