设L为单位面积上衰变了的放射性活度；
A0为单位面积上开始时的放射性活度；
At为单位面积上曝光结束时的放射性活度。
由 L = A0 – At； At= A0 e-λt 得：
t = Ln T
0.693
A0 A0- L
b）经验估计
要使X乳胶产生适宜的黑度，大约需要500～ 1000万β粒子或100～200万α粒子/cm2。
2 . 液体乳胶法
在暗室安全灯下，将所需的乳胶称 出，使其装入烧杯中，置于40ºC水浴溶 解。然后采用滴涂或浸蘸法将乳胶直接 加在载玻片上，并使均匀地铺开。凉干 后连同标本一起进行曝光。
具体又可分为：涂布法和浸蘸法。
（二）染色
1. 前染
是指涂核乳胶前对切片进行染色。 优点：乳胶层不被染色，与后染相比颜色
1. 洗净； 2. 吸水纸吸干； 3. 平铺于标本夹；
4. 干燥。
（二）曝光
曝光 : 把照相乳胶曝露于射线而产生潜影。
1.感光材料的选择: 由溴化银和明胶组成。
明胶是溴化银的支持剂，又是溴原子的吸收剂； 它决定着乳胶的通透性、吸水膨胀、浓度稀释 和坚膜作用等特性。
而乳胶的敏感度决定于溴化银的浓度、颗粒大 小及其配制方法。
（1）准确定位； （2）灵敏度高； （3）能保持机体的完整结构； （4）可以长期保存； （5）操作简便，不需要复杂的仪器和设备。
局限性：
定量误差大，只作相对定量；测定的速度较慢。
二、放射性自显影的一般制作程序
（一）自显影标本的制备 （二）曝光 （三）显影 （四）定影
（五）水洗及干燥
（一）自显影标本的制备
基的两面
核乳胶 0.02~0.5 45 10000
液体、 高 高 干板、
脱基膜
光学显微 及电镜自 显影
感光材料的保存：
（1）在有效期内使用。 （2）周围不能有放射性物质。 （3）X射线乳胶片和幻灯片应注意避光、防潮、 防热，最好在恒温恒湿房间（15~20ºC）保存； （4）液体核乳胶应置于棕色玻璃瓶中，外用黑纸 包好，再用塑料袋包好，保存于4ºC冰箱内。
清晰鲜明。缺点：染色处理可能引起标本中 放射性的损失；对易溶性放射性化合物不宜 采用前染。
2. 后染
是指在切片涂布核乳胶、曝光、显影、 定影后进行的染色。 优点：没有前染的放射性损失问题； 缺点：在染色过程中可能会使显影银粒 消失，乳胶脱落。
（ 三）光学显微自显影的观察与分析
1. 粒子计数法 在一定面积上或一定细胞器上的显影银颗 粒的多少确定样品中的放射性高低。 2. 径迹计数
一般要求在流水中冲洗20~30分钟，然后在空气 中晾干。
第二节 放射性自显影的制作方法
一、宏观放射性自显影的制作方法
（一）整体植株的放射性自显影 （二）放射性纸层析和薄层层析板自显影
（三）土壤整段标本的放射性自显影 （四）观察
二、光学显微自显影
(一)方法 1. 接触法
将试验样品制成石蜡切片，用蛋白甘油 将石蜡切片贴在载片上，可先染或曝光后 染色，干燥后在暗室中将乳胶面对切片， 紧密接触，进行曝光。
（2）显影条件
配制好的显影液应盛于带盖的深色玻 璃瓶中，置于阴凉处或冰箱中。 在温度为18～20ºC 的条件下，显影时 间约为5 ～ 6 分钟。
（四）定影
定影 定影剂硫代硫酸钠和溴化银作用，将
溴化银溶解，从而使未感光的银盐从乳胶中溶 去而成为透明膜。
其反应式如下：
AgBr + Na2S2O3 ⇌ NaAgS2O3 + NaBr NaAgS2O3 ⇌ Na+ + [AgS2O3]NaAgS2O3 + Na2S2O3 ⇌ Na Ag(S O )
2. 定影液的组成
（1）定影剂：硫代硫酸钠，遇酸易分解。 （2）保护剂：常用亚硫酸钠，抑制定影剂的 遇酸分解。 （3）停显剂：常用醋酸、硼酸，中止显影。 （4）坚膜剂：常用明钒、铬钒。
3. 定影条件
温度以19~20 ºC为宜，定影时间约为10 ~ 15分 钟。
（五）水洗及干燥
定影后要经充分水洗，以清除残余的定影剂和未 被显影的银盐。
对于β粒子来说： N/A
t ×曝光时间 = （0.5 ~ 1）×107 粒子/cm2
c）实验曝光法
（三）显 影
显影 指感光后形成潜影的乳胶，在显影剂的
作用下，使潜影转化为金属银的过程。
（1）显影液的组成：
显影剂：常用米吐尔，主要起还原作用。 促进剂：常用碳酸钠，维持碱性条件。 保护剂：常用亚硫酸钠，中和氧化产物。 抑制剂：常用溴化钾，抑制未感光的银盐。
第四章 放射性自显影技术
第一节 原理和一般制作程序 第二节 放射自显影的制作方法 第三节 与自显影质量有关的几个因素 第四节 放射性自显影技术的应用
和特点
放射性自显影
利用照相乳胶记录、检查和测量样 品中放射性核素的分布、定位和定量的 方法。
放射性自显影的特点
根据较厚乳胶层中产生的径迹数，来测定 放射性。 3. 光密度测定：用显微光度计
第三节 与自显影质量有关的 几个因素
一、各种粒子在乳胶中的径迹
α 粒子： 径迹直，密度均匀，图像最好。 β 粒子： 径迹弯弯曲曲，射程因能量而异。 γ 粒子： 一般在乳胶中不留什么痕迹。
二、分辨力
分辨力 用银粒密度最大的点与其密度减
少到一半的点之间的距离（HD）来表示。 影响分辨力的因素：
（1）溴化银颗粒的大小 （2）乳胶厚度 （3）标本厚度 ( 4 ) 标本与乳胶层的距离 （5）射线的能量 ： 3H、14C、 32P （6） 曝光和显影时间
2. 曝光
（1）潜影的形成
将溴化银的晶体点陈制作成有缺陷的，这些 缺陷构成潜影过程中的敏化中心。 当核射线、光线、热、压力等作用于溴化银 时，溴化银中的电子便向敏化中心移动，形 成带负电荷的静电层，然后正电荷的银离子 便向静电层聚集而变成银原子，形成潜影。
（2） 曝光时间
a) 以公式计算曝光时间：
几种自显影感光材料的性能
乳胶名称
幻灯片 电影胶片
X射线乳 胶片
卤化银 卤化 晶体直 银 径（μm） (%)
晶体
灵分
粒子数 敏 辨 产品特点 /1000 μm3 度 力
适用范围
~1 10~15 6
乳胶层约 宏观或光 差 中 15μm涂于片 学显微自
基的一面 显影
6 0.2~3 10~20
乳胶层约 宏观自显 高 差 30μm涂于片 影