一、 铁 染 色 （ferric stain）
原理
铁 ＋亚铁氰化钾
酸性环境 普鲁士蓝 反应
亚铁氰化铁
(蓝色沉淀在含Fe部位)
骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁 幼红细胞内的Fe（细胞内铁）
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素)
铁颗粒、铁小珠、铁团块
细胞外铁(低倍镜观察)
映机体储存铁的金标准。
外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。
二、过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）
一、原 理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含 有过氧化物酶(POX)，它可分解H2O2释放出新生 态的氧，后者氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不 溶性沉淀，定位于胞质内酶所在的活性部位。 二甲基联苯胺法（DAB）原理
（1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法： A、蒸气固定：甲醛
B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙
酮。
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色
（2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
3. 复染：使各种细胞能显示出来
胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞(siderocyte)：
胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。 环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒>6个，围绕 核周2/3以上者。
绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞
三、参考范围
1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约
（－）：无颗粒
（＋）：有少量铁颗粒或偶见铁小珠
（＋＋）：有较多的铁颗粒或铁小珠
（＋＋＋）：有很多的铁颗粒、铁小珠
和少数铁小块
（＋＋＋＋）：有极多铁颗粒、小珠和
很多铁小块，密集成堆。
2. 细胞内铁(中晚幼红细胞，油镜观察)
（1）分级(按铁颗粒数量的多少及大小)
细小颗粒：细沙样铁小粒，不易看清。 粗大颗粒：很容易看清的颗粒。 观察100个中晚幼红细胞，计算出铁
辅助鉴别急性白血病细胞类型
急单：单核细胞阳性，能被NaF抑制。
急粒：粒细胞弱阳性，不被NaF抑制。
M3：强阳性，不能被NaF抑制。 M。 ALL：原幼淋阴性或阳性，不能被NaF
抑制。
【正常血细胞染色反应】 1.单核细胞系统
原始单核细胞 分化差 阴性 分化好 阳性 幼稚及成熟单核细胞 阳性
A
B图：急性单核细胞白血病 α-NAE氟化钠抑制染色 原始、幼稚单核细胞阳性反应被氟化钠抑制
（与A图为同一标本）
B
【临床评价】
主要用于鉴别急性白血病类型
急单
α-NAE +++或 ++++ 被抑制
急粒
-或 弱+ 不被 抑制
急性早幼粒
++
急粒单 急淋
阳性 -
NaF
不被抑制
部分被抑制 部分未被抑制
2. 临床意义
熟逐渐增强。
中性分叶核粒细胞：强阳性 嗜酸粒细胞：阳性最强 嗜碱粒细胞：（－）
2.单核细胞系统 3.淋巴细胞系统 红细胞系统 巨核细胞系统 浆细胞 组织细胞
阴性或弱阳性
阴性
四、临床意义
鉴别急性白血病的类型首选 （1）急淋和急性髓细胞系的鉴别：
急淋：（－），阳性率<3%； 急单：弱阳性； 急粒：阳性（ + ～ + + + ）。
铁染色----中性红、伊红
PAS-------甲基绿
核：中性红、甲基绿、沙黄等。
浆：伊红、刚果红、光绿等。
五、研究对象
外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中 的化学物质：
酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等
第二节 常用细胞化学染色技术


铁染色
过氧化物酶染色
苏丹黑B染色
酯酶染色 过碘酸-希夫反应 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 酸性磷酸酶染色
第三章
细胞化学染色技术
学习目标
1.掌握：细胞化学染色的基本步骤；铁染
色、过氧化物酶染色、酯酶染色、过碘 酸-希夫染色、碱性磷酸酶染色、酸性磷 酸酶染色的正常血细胞染色反应和临床 意义。 2.熟悉：细胞化学染色的概念和临床应用。 3.了解：细胞化学染色的原理和影响因素。
第一节
一、概念
【原理】
α-醋酸萘酚
（基质液中）
水解
α-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）
α-萘酚
重氮盐
（坚牢蓝B）
胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀
【结果判断】
胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒 状沉淀为阳性。
α-醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色)
α-醋酸萘酚酯酶染色
a:单核 b:BPC c:巨核 d:LC(+) e:幼红(-)
主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型： ①急性粒细胞白血病： （+） ②急性早幼粒细胞白血病：强（+） ③急性单核细胞白血病：（－） ④急粒-单：粒细胞（+）单核细胞（－）
⑤急性巨核细胞性白血病：（－）
⑥急性淋巴细胞白血病：（－）
（ 二）非特异性脂酶染色 原 理 ：
非特异性脂酶在相应的pH环境中， 将基质液中相应底物水解，产生含萘酚
【原理】
四甲基联苯胺 （无色）
过氧化氢
POX
（基质中） 粒、单核 细胞胞浆
新生态氧 [O]↑
联苯胺蓝（蓝色）
亚硝基铁氰化钠
蓝色颗粒
（浆内酶部位）
二、ICSH推荐的三种方法
二氨基联苯胺法（DBA）
二盐酸联苯胺法
过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法
三、结果判断
在细胞质内出现金黄色颗粒为 阳性反应。（二氨基联苯胺法）
（++） 颗粒粗大，分布较密， 占胞质 1/2~2/3 ；（d） （+++） 颗粒粗大，呈团块分 布；（e） （++++） 全部胞质均部满颗粒 ，可覆盖胞核（f） 。
【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统
POX主要存在于粒系细胞中。
分化差的原粒细胞阴性;
分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各
阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成
12~44%， I~II型（ I型为主），无Ⅲ
型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒
红细胞。
四、临床意义
铁染色是评估铁缺乏最实用的方法，是
反映储存铁的金标准，是临床应用最广 泛的细胞化学染色之一。
1. 缺铁性贫血：
外铁（－），内铁<10%； 治疗有效后，内外铁 。 2. 铁粒幼细胞性贫血：
外铁；内铁阳性率，环形铁粒幼
2. 单核细胞系统：
（－）或弱（+），阳性颗粒少而细小。
3. 其它系统细胞：
淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核
细胞系统、浆细胞、组织细胞（－）。
【临床评价】
急性髓细胞白血病
鉴别
急性淋巴细胞白血病
1. 急性髓细胞白血病
（1）急性粒细胞白血病 阳性反应
（2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应
2. 急性淋巴细胞白血病
氟化钠抑制试验
在基质液中加入适量NaF,其余染色方 法同上。 两种方法染色后用油镜计数100或200个 被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后 的阳性率或阳性积分。
氟化钠抑制率=
抑制前阳性率或阳性积分 抑制后阳性率或阳性积分 ×100% 抑制前阳性率或阳性积分
A图：急性单核细胞白血病α-NAE染色 原始、幼稚单核细胞多呈强阳性
白血病的诊断：MICM分型
M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类 细胞遗传学分型：与疾病预后有关
分子生物学分型：提高到分子水平
四、基本步骤
1. 固定
正常血细胞的染色反应
与POX染色基本一致
临床意义
与POX染色相似
二、SBB与POX区别：
1. POX特异性高于SBB，而敏感性 低于SBB；
2. POX染色要求涂片新鲜，保持酶活 性，
SBB染色可用陈旧涂片。
四、酯 酶 染 色 一、分类
1. 特异性酯酶（specific esterase） 主要存在于粒细胞，又称“粒细胞酯酶” －氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。
红细胞增多，可见粗颗粒的Ⅲ、Ⅳ型
铁粒幼红细胞。
3. MDS-RAS：内外铁增多，环形铁粒 幼红细胞>15%。
4. 非缺铁性贫血：溶贫、巨幼贫、再障、
白血病等，内外铁正常或增多。
5. 感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等：
外铁增多。
五、应用评价
铁染色是临床常用的一种细胞化学 染色，虽不如血浆铁蛋白敏感，但是反
(α- NBE 敏感性不如NAS-DAE
但特异性较之强)
（ 一）特异性脂酶染色
1. 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
Naphthol AS-D chloroacetate esterase
1. 原理
氯乙酸AS-D萘酚
NAS-DCE
AS-D萘酚
重氮盐(坚牢蓝紫酱)
不溶性的有色(红)沉淀。
NAS-DCE几乎仅出现在粒细胞，其特异性高， 因此又称为“粒细胞酯酶”
概
述
细胞化学染色是细胞学和化学相结合 而形成的一门科学。它以细胞形态学为 基础，结合运用化学反应的原理对血细 胞内的各种化学成分(酶类/脂类/糖类/铁 /蛋白质/核酸等)作定性、定位、半定量 分析的方法。