2．免疫学检测
抗体检测方法 流行病学调查和监测，不能确诊 抗原检测方法 可作确诊 快速免疫诊断试条(RDT) 操作简单、快速,有望替代镜检
Stages of development of Plasmodium falciparum at which antigens detected by malaria rapid diagnostic tests are produced.
Topic: 3E Elimination Eradication End
消灭疟疾！
Science. 2007 Dec 7;318(5856):1544-5.
疟疾防控策略
• 基本原则： 早期诊断，规范治疗 • 标准： 疟疾病人在发生症状的24 小时内接受正确、支付得 起、规范的治疗。 • 好处： –治愈病人 –防止病情恶化 –减少传播
RDT example 3: Amrad ICT
优点： 1. 快速便携 2. 无需专门设备
RDT
采购RDT需考虑的因素： 1. 用于检测的虫株 2. 使用地区流行情况 3. 最终用户 4. 产品质量 …
WHO测试结果
Pf
Pv
Malaria Rapid Diagnostic Test Performance- Results of WHO product testing of malaria RDTs: Round 2 (2009)
靶抗原
疟原虫乳酸脱氢酶 pLDH
恶性疟富氨酸蛋白 HRP2 只能用于恶性疟 疟原虫死亡后依旧长时间存在 醛缩酶 Aldolase 泛种特异性 疟原虫死亡后即消失 更准确反映原虫存活状态 稳定性？ 间日疟特异性依旧在研发中
泛种, 恶性疟特异性, 间日 疟特异性抗体 疟原虫死亡后即消失 更准确反映原虫存活状态
疟疾诊断
疟疾诊断
现场应用 实验室
临床诊断 显微镜 快速诊断 分子生物学 抗体检测
RDT PCR LAMP ELISA IFA
较常用 金标准 最有前景 很敏感
流行病学
临床诊断
常用于高流行区 无需实验设备 依据发热病史 灵敏度不稳定 特异性较差 和类似症状疾病难以鉴别诊断
1、显微镜镜检
<30 min
100 p/uL 中等 差 差 较低
技术要求 0.12–0.40美元; 低流行区高于RDT 费用 0.60–2.50美元 设备: 定量PCR >20,000美元; 普通 PCR和LAMP:约5000美元 每次反应: 0.35–5美元 定量PCR：封闭系统，可自动化 操作 流行区过于敏感？
其它
可以同时进行其它疾病的 诊断，费工费力
耐高温高湿，无需电力 和专门设备，质量需进 一步改进
谢谢
厚薄血片
厚薄血膜的比较

厚血膜
裂解的红细胞 血量较大 0.25 l 血液/100 视野 血样较浓缩 敏感性更高 原虫密度计数 较难进行虫株鉴别

薄血膜
单层，固定的红细胞 血量较少 0.005 l 血液/100 视野 更有利于形态鉴别 需花更多时间读片 密度低，较易漏诊
具有评估疗效的潜在价值 三日疟，卵形疟依旧在研 发中 稳定性？
快速免疫诊断试剂盒 (RDTs)工作原理
如何使用RDT
如何使用RDT
如何使用RDT
如何使用RDT
如何使用RDT
如何使用RDT
RDT example 1: ParaSight F test
RDT example 2: Opt方法 检测特异性、 敏感性优于镜检 检测成本高于 镜检 主要用于特殊 诊断和抗药性检 测
bp
PCR检测
检测样本：抗凝血(200 µl) 或滤纸血(5 µl) 检测灵敏性： 全血血样：0.1 parasite/µl 滤纸血：2 parasites/µl 可鉴别虫株 可检测药物抗性相关的基因突变 不能进行原虫密度定量 可用于流行病学调查 需专门仪器设备，试剂和技术
疟疾诊断
全球疟疾形势

全球一半以上的 人口都生活在疟 疾流行区 每年2亿多人感染
每年80多万人死 于疟疾
主要因恶性疟 主要为非洲儿童

每40秒就有1名非洲儿童死于疟疾！
Gates Foundation Malaria Forum, 16-18 October, Seattle.
Bill and Melinda Gates Call for New Global Commitment to Chart a Course for Malaria Eradication (3E)
疟疾诊断方法
临床诊断: 根据症状 实验室诊断: 查见原虫 •直接检测原虫（形态学） 显微镜镜检 QBC method •检测抗原 快速诊断(RDT): HRP-2, pLDH, Aldolase 分子诊断 – PCR, Real-time PCR and LAMP… •检测抗体 免疫荧光抗体试验(IFA) 酶联免疫试验(ELISA)

常用疟疾实验室诊断方法比较
显微镜镜检 所需时间 检测灵敏度 敏感性和特异性 虫株鉴定 定量 免疫学快速诊断 (RDTs)
分子检测 (PCR, LAMP) 普通PCR: >6h 定量PCR: <1h
0.004–5p/uL 非常好 非常好 普通PCR: 不能定量 定量PCR: 可以定量 较好
>1h
熟练技术人员: 5–10 p/uL 普通技术人员: 100 p/uL 依赖于镜检技术人员 原虫密度低时较差 金标准 较高