(二)Vmax
Vmax表示在一定酶量下的最大反应速率， 即酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度 呈正比。在酶的浓度不变时，对于特定底物而言， Vmax也是一个常数。
(三)Km和Vmax的测定 将米－曼氏方程进行倒数处理，而
转换成直线方程为：
1 Km [S] Km 1 1 Vo Vamx[S] V max [S] V max
Vmax［S］ VO =
Km +［S］
6．如一个酶催化正逆两个方向，测定正逆两个 方向底物的Km及底物浓度，可大体推测该酶在 体内催化反应的方向及其催化效率。 7．在代谢酶系中，当一组酶催化连续的代谢反 应时，如已知各酶的Km及其相应底物的浓度， 有助于寻找代谢的限速步骤。一般Km值最大的 酶所催化的反应为该酶系的限速步骤。
1、酶浓度
在［S］＞＞ ［E］时，酶促反应随酶浓度 的增加而增加，即反应速率与酶的浓度成正比。
病理情况下，酶浓度过高时，底物过早而且 过多的被消耗，影响酶活性的测定，故需用生理 盐水或其它缓冲液进行适当的稀释，但要注意稀 释对测定结果的影响，如低酶浓度时，酶易解离 为单体，常比多聚体更易失活。
2、底物的种类和浓度
的可调节性。
常用术语
酶促反应： 由酶所催化的反应
酶活性： 酶催化化学反应的能力
底物：
酶催化所作用的物质
产物：
酶促反应的生成物
酶的特异性：酶对作用物的选择性
激活剂： 加速酶促反应的物质
抑制剂： 减慢甚至终止酶促反应的物质
2、酶的结构与功能
单纯酶：由约100～10000个氨基酸肽键相连而成
酶
结合酶 蛋白质——酶蛋白
Vmax［S］ VO =
Km +［S］
3．如已知酶的Km，可计算某一底物浓度时反应速率v 和最大速率Vmax的比值，并可推知酶的活性中心被底 物饱和的分数。同样，如要求v和Vmax有一定的百分 比，也可算出所需底物浓度为其Km的多少倍。 4．利用工具酶来测定体液中某一成分的浓度或某一 酶的催化活性浓度时，可根据米-曼氏方程或其衍变 方程式来计算工具酶的用量。 5．测定Km值可鉴别不同来源但催化相同反应的酶是 同一种酶或是同工酶。
1 Km [S] Km 1 1 Vo Vamx[S] Vmax [S] Vmax
1 Ｖo
1／Ｖmax
斜率＝ Km V max
１ －
Km
0
双倒数作图法
1 ［Ｓ］
三、酶促反应的影响因素及反应条件的选择
1、酶浓度 2、底物的种类和浓度 3、缓冲液的种类、离子强度和pH 4、温度 5、激活剂与抑制剂 6、其它
对结合酶来说，辅酶或辅基参与酶活性 中心的组成。
二、酶的催化作用机制
1、活化能 2、酶降低活化能的作用机制
酶通过与底物形成一种或多种中间 复合物来降低反应的活化能
三、酶的命名、分类与编号
第二节 酶促反应动力学
一、酶促反应
E+S
K1K2ES来自K-1酶 底物
酶-底物复合物
E+P
酶 产物
米-曼氏方程
一般选择Km最小 的最适底物，酶测定 时底物浓度最好为Km 的10～20倍。
零级反应 一级反应
(三) 缓冲液的种类、离子强度和pH
酶与底物结合的能力，酶的催化活性，会 受不同pH的影响，只有在最佳缓冲系统内才能 充分表达。各种酶都具有使酶促反应速率最大 时的pH，即最适pH。一般来说，动物酶多在 6.5～8.0之间。但ACP反应的最适pH为4.0～7.0 而ALP则为9.0 ～ 10.0。
最适pH并非酶的特征性常数，易受缓冲液的种类、离子 强度及底物浓度不同等因素影响。临床酶学测定时发现， 用不同种类的缓冲液配制相同pH介质所测酶活性并不相同。 缓冲液的离子强度也可影响酶的活性。必须强调的是，各 种体液样品本身也是缓冲液，和底物混合后不一定维持原 来pH，也会影响酶活性测定结果，所以应严格掌握测定样 品与底物的用量比例，一般样品在总体积中的比例应不超 过10％。此外，缓冲液中的物质不应与分析系统中的任何 物质反应，否则应特别加以说明。
诊断酶学 赵敏
第六章 诊断酶学
第一节 概述 第二节 酶促反应动力学 第三节 血清酶 第四节 酶活性浓度的测定技术 第五节 酶的免疫化学测定 第六节 同工酶及其亚型测定 第七节 临床常用血清酶、同工酶及其
亚型分析
第一节 概 述
一、酶的组成、结构和功能
1、酶的本质和特性 本质：蛋白质（绝大部分）或核酸（极少数） 特性：极高的催化效率、高度的特异性、催化
辅酶
非蛋白部分——辅因子
辅基
2、酶的结构与功能
酶是蛋白质，具有一、二、三、四级结构 单体酶：只由一条多肽链构成的酶 寡聚酶：由多个相同或不同亚基以非共价键连接的酶 多酶体系：在细胞内存在着许多由几种不同功能的酶
彼此聚合而成的多酶复合物
酶的活性中心
酶的必需基团在一级结构上可能相距很 远，但在空间结构上彼此靠近，组成具有能 与底物结合并起催化反应的特定空间结构区 域，称为酶的活性中心。
(四)温度
酶促反应也有一个最适温度，在其 两侧反应速率都比较低。在达到最适温 度以前，温度每增加10℃，反应速率增 加1～2倍。但温度对酶活性的影响具有 双重性，一方面温度升高可加快酶促反 应；而另一方面温度可能使酶失活。
人体大多数酶的最适温度为37℃左右，超 过42℃酶活性就逐渐降低，至60℃时酶因蛋 白变性而失去活性。反之，酶在20℃以下时 几乎无催化反应。酶的最适温度与底物浓度、 pH、离子强度、保温时间等许多因素有关。
最大反应速率
VO =
反应速 度
Vmax［S］ 底物浓度 Km +［S］
米氏常数
（一）Km
Vmax［S］ VO =
Km +［S］
若v=0.5Vmax，则Km=[S]，可见Km值 等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax一 半时的底物浓度。Km值一般在10-6～10-2mol ／L之间。Km只与酶的性质有关，而与酶的 浓度无关。
Vmax［S］
Km 意义：
VO = Km +［S］
Km是酶的特征性常数之一，在临床酶学分 析中具有重要意义。
1．1／Km可近似地表示酶对底物的亲和力的大小， Km值越小，表示酶与底物的亲和力越大，反之亦然。
2．如果一个酶有几种底物，则对每一种底物各有 一个特定的Km值，其中Km值最小的底物大都是该酶的 最适底物或天然底物。