Glu可以通过两条路径转化成α-KG（α酮戊二酸）
2、Glu——α-KG
2、Glu——α-KG
单独的α-KG不能在缺 乏Gln时维持肿瘤细胞 生长，但是和NEAA联 用可以维持肿瘤细胞的 增殖
2、Glu——α-KG
验证转氨酶在PDAC代谢Gln中的重要性：方法
3、确证转氨酶GOT1
验证转氨酶在PDAC代谢Gln中的重要性：结果
3、确证转氨酶GOT1
验证是哪种转氨酶
3、确证转氨酶GOT1
3、确证转氨酶GOT1
3、确证转氨酶GOT1
探究GOT1在Gln代谢中发挥的作用
4、GOT1对Gln代 谢产物的影响
探究GOT1在Gln代谢中发挥的作用
4、GOT1对Gln代 谢产物的影响
磷酸戊糖途径
4、该通路对Gln代谢氧 化还原平衡的影响
1、Gln——Glu
探索Gln代谢在PDAC生长中的作用
RNAi(GLS)
GFP：绿色荧光蛋白
1、Gln——Glu
GLS：谷氨酰胺酶 （glutaminase）是酰胺酶的一 种，是一种催化L-β-谷氨酰胺 水解成L-谷氨酸和氨的反应的 酶。
探索Glu在PDAC生长中的作用
1、Gln——Glu
Glu能够在Gln缺乏 时维持肿瘤生长
提要
ME1（malic enzyme） 苹果酸脱氢酶 MDH1（malate dehydrogenase） 苹果酸酶 OAA（oxaloacetate） 草酰乙酸 GOT1（aspartate transaminase） 天冬氨酸转氨酶1
目录
研究历程
1 2
Gln——Glu Glu——α-KG 确证转氨酶GOT1 GOT1对Gln代谢的影响
各通路关键酶对ROS的影响
4、该通路对Gln代谢氧 化还原平衡的影响
DCFDA:荧光探针进行活 性氧检测
G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱 氢酶） IDH1：异柠檬酸脱氢酶
OAA——malate过程对ROS的影响
4、该通路对Gln代谢氧 化还原平衡的影响
苹果酸对ROS的影响
4、该通路对Gln代谢氧 化还原平衡的影响
苹果酸
部分缓解Gln缺乏或 GOT1干扰
证明OAA或苹果酸是通过平衡氧化还原状态维持细 胞增殖
6、该通路在 PDAC生长中 的必须性
体内实验：移植瘤
6、该通路在PDAC生长中的必须性
正常细胞的对照试验
6、该通路在PDAC生长中的必须性
Kras基因在Gln代谢中的作用
mall developed by Gu
GOT1和 GLUD1转 录水平 GOT1和 GLUD1蛋 白表达水平7、Kr Nhomakorabeas基因的调控
对抑制剂 的敏感性
Kras
Kras基因在Gln代谢中起重 要作用
7、Kras基因的调控
Kras基因在Gln代谢中的作用 Kras干扰后，在 转录和蛋白水平 GOT1减少， GLUD1增加 PDAC细胞对AOA敏 感，而EGCG无太大 影响 Kras干扰后，细胞 对AOA具有一定的 抵抗力，对EGCG反 而有一定的敏感性
Cells were plated in the complete media (10mM glucose and 2mM Gln) which was replaced the following day with glucose or Gln-free medium supplemented with 10% dialyzed FBS.
3
4
5
Asp生物合成的路径探索
6 该通路在PDAC生长中的必需性
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8
Kras基因的调控 结论和讨论
1、Gln——Glu
研究基础：Gln在PDAC中的重要性
PDAC：pancreatic ductal adenocarcinoma （胰导管癌）
Figure 1.a PDAC proliferation requires both glucose and glutamine.
Gln代谢通路模型
5、Asp生物合成的路径探索
Gln-Asp中关键酶确证
5、Asp生物合成的路径探索
6、该通路在PDAC生长中的必须性
验证该路径的 其他部分是否 为PDAC生长所 必需
6、该通路在PDAC生长中的必须性
GOT1存在 OAA
ASP， α-KG可以缓解 PDAC缺乏Gln GLS和GOT1干扰时促进 肿瘤生长