04.12.2020
分离 纯化
性能 鉴定
纯种分离的 常用方法有 平板划线分 离法、稀释 分离法和涂 布分离法。
一般生产性 能的测定通 过初筛和复 筛的方法来 确定。
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1.样品采集
① 原则
样品来源越广泛，获得新菌种的可能性越大。
② 土壤采样方法
土壤的有机质含量和通风状况（5～25cm深度） 土壤的细pH菌和、植放被线状菌况：耕地、菜园和近郊土壤；
第二章
菌种选育、保藏与复壮
主讲： 6889484@
Contents 第一节 食品发酵与酿造工业菌种 第二节 菌种选育 第三节 菌种保藏与复壮 第四节 国内外主要菌种保藏机构
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第一节 食品发酵与酿造工业菌种
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一、现代发酵工业对菌种的要求
（1）非病源菌，不产生有害活性物或毒素； （2）发酵周期短，发酵产物的产生能力强； （3）高转化，易分离纯化，低成本，高质量； （4）生长繁殖力强，速度快，较强产孢能力； （5）原料广，价廉，易被微生物利用、转化； （6）对添加的前体物质有耐受能力； （7）菌种纯，遗传特性稳定，抗噬菌体能力强。
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自 然 选 育
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05年江南大学微生物(发酵)考研试题
资料显示，某些芽孢杆菌具有分解和利用葡聚糖的能 力，请设计方案从自然界中筛选一产葡聚糖酶的菌株， 并简要分析各主要步骤的依据。
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三、诱变育种
诱变育种：指人为地、有意识地将对象生物置于诱变因子
③ 富集培养的方式 分批培养（Batch culture ） 连续培养（Continuous culture ） 分批补料培养（Fed-batch culture ）
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3.纯种分离
（1）平板划线分离法 （2）稀释分离法 （3）涂布分离法 （4）毛细管分离法 （5）小滴分离法
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溶磷细菌的平板筛选(5d)
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高效溶磷的真菌菌株
青霉菌溶磷实验
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4.性能鉴定
生产性能测定
通常使用初筛和复筛的方法确定。直接从自然界分离得到的菌株为野 生型菌株。我们常将这些自然界中直接获得的新菌株称为进一步育种 工作的原始菌株或出发菌株。
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初筛和复筛
（1）初筛（定性——粗放！） ① 平板筛选 （变色圈、透明圈、生长圈、抑菌圈 ） ② 摇瓶发酵筛选
（2）复筛（定量——精确！） 1个菌株重复3～5瓶，精确分析 如酶活力单位、耐酒精程度等。
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地•理pH＜条7酵件.0母：菌霉：菌果、园酵树母根的菌土居壤多中；
季节条霉件 菌：动植物残体及霉腐土层中；
•pH7.0黑～曲7.霉5：：细稻菌场、、谷放物线堆菌积丰处富。
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2.富集培养
① 富集培养的目的 利用人工环境，使样品中目标微生物成为优势菌。
② 富集培养的方法 控制培养基的营养成分 控制培养条件
毒性试验
若毒性大而且无法排除者应予以淘汰。
种属鉴定
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菌种种属的鉴定
• 鉴定工作的内容 （1）测定一系列必要的鉴定指标； （2）查找权威鉴定手册，确定菌种类型。 • 鉴定方法 （1）经典的分类鉴定方法：形态学特征；生理生化特征；
血清学试验与噬菌体分型；氨基酸顺序和蛋白质分析 （2）现代分类鉴定方法：微生物遗传型；细胞化学成分；
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拟康氏木霉
产生纤维素酶，羧甲基纤维素酶、纤维二糖酶，可完全水解纤维素。
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第二节 菌种选育
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一、新菌种的分离与筛选
样品 采集
富集 培养
样品来源越 广泛，获得 新菌种的可 能性越大。
利用人工环 境，使样品 中目标微生 物成为优势 菌。
用途
食用、医药
食用、医药
葡萄糖、糊精、酒精发酵、啤酒酿造
酱油速酿、饲料
由葡萄糖制造果糖
医药、食用
酵母菌体蛋白
食品工业
食用、医药
柑橘罐头脱除苦味
分解单宁、酶精制、酒精发酵工业
同枯草杆菌蛋白酶
葡萄糖制造、酒精厂糖化、医药
腐乳生产
蛋白除葡萄糖、脱氧、食品罐头贮存
淀粉和食品加工、饲料
食用、化工
葡萄糖制造、酒精厂糖化、调色剂
酱油酿造
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枯草芽孢杆菌
7 04.12.2020
戊糖片球菌
8 04.12.2020
植物乳杆菌
9 04.12.2020
多粘类芽孢杆菌
10 04.12.2020
酿酒酵母
11 04.12.2020
粉状毕赤酵母
12 04.12.2020
红葡萄浓缩汁中的酵母菌形态
13 04.12.2020
产朊假丝酵母
单细胞真菌 脂肪酶 淀粉酶 蛋白酶
14 04.12.2020
黑曲霉
15 04.12.2020
黑曲霉
16 04.12.2020
青霉
17 04.12.2020
米曲霉
蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等
18 04.12.2020
根霉
19 04.12.2020
绿色木霉
产生微晶纤维素酶，羧甲基纤维素酶、纤维二糖酶，可完全水解纤维素。
数值分类法
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二、自然选育
自然选育的定义
利用微生物在一定条件下产生自发变异，通过分离、筛选，排除劣质性状的菌 株，选择出维持原有生产水平或具有更优良生产性能的高产菌株，达到纯化与 复壮菌种、保持稳定生产性能的目的。其主要原理是微生物群体分离。
自然选育的方法
（1）通过表现形态淘汰不良菌株； （2）考察目的代谢产物产量； （3）进行遗传基因型纯度试验，考察菌种纯度； （4）传代稳定性试验：斜面传3-5代。
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04.12.2020
4
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类别
细菌 酵母菌
霉菌
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微生物名称 短杆菌 短杆菌 枯草杆菌 枯草杆菌 巨大芽孢杆菌 酒精酵母 假丝酵母 脆壁酵母 黑曲霉 黑曲霉 黑曲霉 栖土曲霉 根霉 毛霉 青霉菌 木霉菌 黄曲霉菌 红曲霉 米曲霉
产物 谷氨酸 肌苷酸 淀粉酶 蛋白酶 葡萄糖异构酶 酒精 单细胞蛋白 乳糖酶 柠檬酸 柚苷酶、酸性蛋白酶 单宁酶、糖化酶 蛋白酶 糖化酶、甾体激素 蛋白酶 葡萄糖氧化酶 纤维素酶 淀粉酶 糖化酶、红曲色素 蛋白酶