培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案目录1 概述2 验证目的3 适用范围验证小组成员与职责4文件资料及培训确认5编制依据6验证计划7风险评估分析8 9 验证内容 10验证结果的分析与评价 11验证周期页 28共页 1 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案页 28共页 2 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案页 28共页 3 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案1、概述1.1我公司小容量注射剂车间2号生产线，按GMP2010版及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。

维生素C注射液（5ml:0.5g）因无法进行F≥0-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除≤108分钟湿热灭菌，以达到SAL菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。

1.2培养基灌装验证是用和实际生产工艺相同的条件与操作方法（包括生产环境），向安瓿内灌装经除菌过滤的培养基，然后将此模拟制品在适当条件下培养，以确认工艺过程的可靠性。

对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。

在正式生产前必须按维生素C注射液（5ml:0.5g）生产工艺进行培养基模拟灌装验证。

1.3验证次数按2010版GMP附录1要求,因该生产线为新建设施，本次为规格为5ml培养基模拟灌装试验首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。

2、验证目的2.1证明无菌生产区的设计及其设备布局，环境及卫生状态、人员无菌操作等各方面因素均能保证产品的无菌性。

2.2确定生产最差条件下仍能保证产品的无菌性。

2.3通过培养基模拟灌装试验确保生产符合现行GMP法规要求。

3、验证范围本验证方案适用于小容量注射剂车间无菌灌装生产线（二线）正式投入使用前培养基模拟灌装试验的验证。

4、验证小组成员与职责页 28共页 4 第培养基模拟灌装无菌生产工职责4.2收集整理验证数据，准备、验证小组：检查和实施确认方案；设计、组织和协调验证试验；偏差处理，编写确认报告；再验证周期的确定。

,对验协调验证小组的工作组织编写验证方案验证小组组长：,领导协调验证项目的实施, 审核批准验证方案、偏差及验证报告。

证过程的技术负责,编写验证报告，负责协调确认方案的实施，相关,验证小组副组长：负责起草验证方案协助收集整理验证数据，操作规程的修订，对偏差提出纠正措施建议。

品管部长：审核验证过程的检测数据，验证数据的可靠性，负责验证过程检验方法的确定及安排相关检验工作，负责签发检验报告。

QA：负责验证过程中取样、监控。

：负责微生物项目的检测。

QC 机修工：负责验证过程中设备的维修，参与验证模拟维修活动，确保设备运行正常。

配剂操作工：负责配料操作和除菌过滤操作。

洗瓶操作工：负责洗瓶和安瓿灭菌操作。

灌封操作工：负责灌封操作。

统计员：负责验证所需物料的领取工作，负责验证资料、数据收集、记录、整理。

5、文页 28共页 5 第培养基模拟灌装无菌生产工5.2培训确认在进行培养基无菌灌装模拟试验验证之前，方案起草者对所有执行本方案人员进行了培训，使每个参与方案的执行人员都理解方案内容，具备页 28共页 6 第培养基模拟灌装无菌生产工6、编制依据《附录：无菌药品》2010《药品生产质量管理规范》（年修订）、6.1 6.2《中国药典》2010年版二部《药品（无菌药品）GMP实施指南》6.3 日至年日月年7、验证时间计划：月风险评估分析8、通过风险评估，确认本次验证活动需要验证的项目风险描述可严风风险控制措施验证项目页 28共页 7 第培养基模拟灌装无菌生产工9、验证内容9.1厂房设施、公用系统、关键设备的确认已经完成，并且合格。

页 28共页 8 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案进入A/B洁净区人员已按更衣程序进行确认，并且严格按《人员进出A/B级洁净区净化更衣操作规程》更衣，不会对洁净区及药品质量带来不良影响，消除了生产产品受更衣过程中人员所带来污染的风险，符合GMP规范要求。

验证可接受标准9.3 版》附录无菌药品第按照《药品生产质量管理规范9.3.1201047条相关规定：培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。

批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量。

培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应当遵循以下要求：支时，不得检出污染品。

（一）灌装数量少于5000支支污染，需调查，可考虑重复试验；有2支时：有至（二）灌装数量在5000100001 污染，需调查后，进行再验证。

（三）灌装数量超过10000支时： 21有支污染，需调查；有支污染，需调查后，进行再验证。

（四）发生任何微生物污染时，均应当进行调查。

综合上述标准，本次验证数量定在9.3.28000-120005ml，且其污染数支之间，灌装量为不得超过1支。

验证活动准备工作9.4 9.4.1培养基准备经湿热灭菌并用橡胶塞封瓶，×经确认合格的胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)250g20个，金黄色葡萄球菌、枯个，沉降菌培养皿60支，接触碟口的无菌取样试管915 个。

6草芽孢杆菌和白色念珠菌等各类菌种，经灭菌的具塞三角瓶工器具灭菌和准备9.4.2将模拟灌装活动中需要用到的生产工器具、洁净服和设备提前一天进行灭菌，按相要求储存，将需要使用的消毒剂提前一天进行无菌过滤准备，将无菌操作区关SOP SOP提前一天按清洁要求进行清洁消毒。

页 28共页 9 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案9.5配料：按《针剂配剂岗位操作规程》操作，取适量（约20kg）注射用水，加入已清洁灭菌的稀配罐中，注射用水温度冷却至20-25℃，另取注射用水约3kg，加入已清洁灭菌的不锈钢容器中，再缓缓加入胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)1650g搅拌使其溶解加入稀配罐内，再补加注射用水至55kg，搅拌20分钟使溶成均匀溶液。

QA人员在稀配室取样口用2个灭菌的具塞三角瓶分别取样50ml，盖塞，包好在瓶身标明取样位置、取样数量、取样时间和样品名称后送化验室检测微生物。

9.6除菌过滤用经灭菌的0.22μm聚醚砜除菌过滤器，过滤上述培养基溶液，在A级层流保护下，取经除菌过滤的培养基200ml分装于9支10ml的无菌试管和4个无菌三角瓶中，盖塞，包好送化验室进行培养基的微生物生长实验和培养基无菌性检查。

9.7洗烘瓶灌封按《安瓿清洗、干燥灭菌岗位操作规程》进行洗瓶。

将经隧道烘箱灭菌合格的安瓿送入灌装线，按《灌封岗位操作规程》、《立式灌装封口机操作规程》开启灌装机，在与实际生产环境相同的条件下，将过滤后的培养基溶液灌入安瓿内，并封口，调节装量为5ml∕支，用洁净区无菌空气代替惰性气体。

无菌灌装最长时间9小时（根据生产工艺规程制定）。

全过程设备慢速运行（灌装速度80-100支/分钟）增加灌装时间，增大受污染的几率。

灌装设置前中后三个阶段，每个阶段约灌装3500支，其余时间设备正常运行(不走瓶)，灌封完的样品通过传送带及时传出无菌区，每灌封一盘及时记录好灌封时间和盘号放在装中间产品的盘内。

9.7.1最差灌装条件的模拟9.7.1.1设备模拟维修在灌封正常运行过程中，停灌30分钟，进行设备模拟维修，保持现有人员在操作间内，维修结束按《立式灌装封口机清洁操作规程》的清洁SOP清洁消毒，标记设备再次运行灌装的样品（约800支），并在记录上做好备注。

9.7.1.2模拟现场人员最大控制数根据无菌灌封室正常生产最多人数控制，在灌装正常运行过程中，模拟现场允许进入5人，标记该过程中生产出的样品（约800支），并在记录上做好备注。

9.7.1.3模拟灌装针/管调整、更换在灌装正常运行过程中，进行紧急停机，模拟调整、更换灌装针/管2支或以上，标记更换针/管后灌装的样品（约800支），并在记录上做好备注。

9.7.1.4模拟空瓶倒瓶、破瓶在灌装正常运行过程中，模拟倒瓶，破瓶情况，停灌处理，处理结束后继续灌装，标记此后灌装的样品（约800支），并在记录上做好备注。

9.7.1.5模拟抽样处理的过程页 28共页 10 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案在灌装正常运行过程中，模拟三次抽样测定可见异物和装量的过程，标记抽样过程中进行灌封的样品（约800支），并在记录中做好备注。

9.7.2灌装过程的动态监测9.7.2.1人员表面微生物取样：对进入灌装区域的所有人员离开无菌区前进行不少于5个位置的用接触碟进行表面微生物取样，取样部位：口罩、帽兜额头处、袖口、胸口（拉链中心位置）、前臂、手套。

9.7.2.2沉降菌的动态监测：灌装全过程中应对灌装A级区和灌封室进行全程动态沉降菌监测，每过4h更换取样碟，取样位置设为灌装针头处、出瓶口处、灌封室。

9.7.2.3对A级灌装区和灌封室悬浮粒子的全程动态监测。

9.7.2.4对A级灌装区域的动态浮游菌取样：灌封过程中选定灌装针头处每4小时进行浮游菌取样检测一次，B级区每班检测一次。

9.7.2.5操作完成后对关键设备表面取样：相关操作程序结束后，对关键设备表面用灭菌的0.9%氯化钠溶液润湿棉球（棉签），然后用棉球（棉签）擦拭以下各点，取样面积为5 cm×5cm /个，再棉球放入20ml灭菌的0.9%氯化钠溶液中，充分振摇，再按薄膜过滤法进行微生物检查。

以排除设备污染，取样部位包括：A 级安瓿转盘、A 级操作台面、B级传送带表面，B级灌装间墙面。

9.7.2.6对安瓿的取样：在验证过程的前、中、后期用灭菌的镊子在隧道烘箱出瓶口处随机抽取安瓿2支×2，分别装入足量已灭菌硫乙醇酸盐流体培养基与改良马丁培养基的三角瓶内，用硅胶塞盖住，立即送化验室按《无菌检测操作规程》进行无菌检测，分别在23-28℃与30-35℃培养14天，要求无菌生长。

9.8灯检检查将已灌封完毕的产品传入灯检区域，翻转三次确保培养基与包材内壁充分接触，剔除破页 28共页 11 第培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案瓶，将其余产品按原灌装盘号分别装盘送培养区域，每盘内放入原灌封物料标签和灯检合格数量。

9.9培养基无菌性检查9.9.1方法：将除菌过滤后的培养基装于4个无菌三角瓶中，其中2个三角瓶在23～28℃培养14天；另2个三角瓶在30～35℃培养14天。

9.9.1.2可接受标准：4个三角瓶中的培养基在14天内应无任何微生物生长。

9.9.2培养基的微生物生长试验：9.9.2.1方法：质检中心QC人员将QA所取的9支样品，在2支10ml试管中接种枯草芽孢杆菌，接种量＜100cfu/管，另取一支作为空白对照；在2支10ml试管中接种白色念珠菌，接种量＜100cfu/管，另取一支作为空白对照。

在2支10ml试管中接种金黄色葡萄球菌，接种量＜100cfu/管，另取一支作为空白对照。

接种后盖塞、封口并分别在30～35℃（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌）和23～28℃（白色念珠菌）培养 72小时。